[發明專利]一種解淀粉芽孢桿菌活菌制劑的制備工藝

在審

• 申請號: 201410436585.1
• 申請日: 2014-08-29
• 公開（公告）號: CN104232528A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 饒犇;周榮華;廖先清;劉芳;陳偉;明京;江愛兵;張光陽;楊自文
• 申請（專利權）人: 湖北省生物農藥工程研究中心
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/07
• 代理公司: 武漢開元知識產權代理有限公司 42104
• 代理人: 朱盛華

技術領域

本發明涉及一種解淀粉芽孢桿菌活菌制劑的制備工藝。

背景技術

解淀粉芽孢桿菌(Bacillus?amyloliquefaciens)是一種好氧產芽孢的革蘭氏陽性桿狀細菌，形成芽孢，芽孢卵圓形，孢囊膨大。該菌在自然界分布廣泛，容易分離培養，對人畜無毒無害，不污染環境。其代謝產物較為豐富，依據合成方式的不同,由芽孢桿菌產生的抑菌物質可分成兩大類,一是核糖體途徑合成前體,然后通過翻譯后修飾而形成的抑菌肽；二是非核糖體途徑合成的抑菌肽。由于解淀粉芽孢桿菌具有較好的廣譜抗菌活性和較強的抗逆能力，生長快，穩定性好，非常適合作為生防菌大量生產和應用。

鑒于解淀粉芽孢桿菌良好的特性，國內已有廠家生產解淀粉芽孢桿菌類產品，但是相關產品普遍質量不高。目前解淀粉芽孢桿菌制劑常見的生產方法是采用相關的芽孢桿菌生產菌種，分批發酵培養，至其大部分或者全部形成芽孢時，采用板框過濾或者離心的方式進行濃縮，添加助劑后烘干或者噴霧干燥得到解淀粉芽孢桿菌的活菌制劑。這些方法存在著以下不足：

1、發酵罐裝料系數為60％-70％，設備利用率不高；

2、由于采用的分批發酵，導致發酵初始培養基濃度過高，接種后延滯期較長，發酵過程中副產物形成較多，發酵產品濃度上不去，最終導致發酵成本較大；

3、發酵液的濃縮一般采用的絮凝/板框過濾或者離心技術，這兩種技術一般都會產生大量的廢水，后續處理成本較高；

4、采用絮凝/板框過濾或者離心技術還會造成發酵上清里面的有效成分丟失，造成產品效果的下降；

5、噴霧干燥一般設定的入口溫度為180℃至200℃，出口溫度為80℃到100℃，在這樣較高的工作溫度下，某些品種的菌數會有一定程度的下降，直接影響了產品的品質。

真空薄膜蒸發器是一類蒸發器的總稱，特點是物料液體沿加熱管壁呈膜狀流動而進行傳熱和蒸發，優點是傳熱效率高，蒸發速度快，物料停留時間短，因此特別適合熱敏性物質的蒸發。該類蒸發器包括MVR(機械式蒸汽再壓縮)蒸發器，降膜式濃縮蒸發器和板式濃縮蒸發器等等。常常應用于中藥活性物質濃縮，食品添加劑濃縮，抗生素濃縮，酶制劑濃縮等領域，但目前還沒有用于活菌制劑濃縮方面。

多級低溫噴霧流化干燥造粒相較于常規噴霧干燥塔，采用了多種先進的技術，比如塔內用了多個噴槍結構，噴槍采用的是高壓噴嘴，噴出的霧滴分散效果好，且多個噴嘴噴出的霧滴相互碰撞，極易形成大顆粒；而沒有形成顆粒的則被旋風分離器捕集，然后返回塔頂霧化區進行粉體的重新附聚和造粒；并且塔底有流化床可對形成的顆粒進行二次干燥，進一步降低顆粒的含水量；該系統要求進料有很高的固含量(10％-25％)，這樣不需要粘合劑就能直接形成顆粒；由于是多級干燥系統，而且物料含水量不高，所以該設備的操作溫度相比常規噴霧干燥塔要低，一般風溫度控制在130℃-180℃，出口溫度控制在60℃-80℃之間，這樣該系統具備很好的干燥熱敏性物料的能力，將該技術應用于活菌制劑的干燥上，可很好的保留產品中的生物活性，獲得高質量的產品，以及環保，工序少等優點。

發酵和干燥造粒會產生大量的廢氣，里面常含有揮發性有機物(VOC)，硫化氫，氨氣，硫醇類等各種污染物，同時伴有難聞的惡臭味，過去發酵企業一般將其直接排放或者簡單的用水噴淋后排放，兩種處理方式會造成對環境的嚴重污染。采用合適的化學試劑直接氧化廢氣中的相關污染物或者用物理方法分解其中的污染物是比較好的處理方法，能夠解除廢氣中的惡臭味，減少環境污染。

發明內容

本發明的目的是針對上述現狀，旨在提供一種設備利用率高，產品質量提高，生物活性保持的比較好，廢氣，廢水達標排放，能夠大規模產業化生產，產品質量更加穩定，產量更高，生產成本明顯降低的解淀粉芽孢桿菌活菌制劑的制備工藝。

本發明目的的實現方式為，一種解淀粉解淀粉芽孢桿菌活菌制劑的制備工藝，具體步驟如下：

1)一級種子培養：5000ml三角瓶中裝有2000ml一級種子培養基，115℃-121℃濕熱滅菌15-30min，取10ml解淀粉芽孢桿菌活菌凍干管菌種接種于一級種子培養基中，在30℃-35℃培養8～10h,所用培養基的原料及用量為：淀粉0.5％-2.5％，牛肉膏0.5％-3％，蛋白胨0.5％-3％，氯化鈉0.5-1％，培養基pH為6.5-7.5；