[發明專利]以羊糞浸出液培養蛋白核小球藻的培養基及培養方法

無效

• 申請號: 201410436472.1
• 申請日: 2014-09-01
• 公開（公告）號: CN104212718A
• 公開（公告）日: 2014-12-17
• 發明（設計）人: 王培磊
• 申請（專利權）人: 臨沂大學
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種以用羊糞浸出液為主要氮源培養蛋白核小球藻的培養基，其特征在于配方如下：

羊糞浸出液85毫升，硝酸銨3毫克，磷酸二氫鈉5毫克，氯化銨2毫克，海泥抽取液1毫升，土壤抽出液1毫升，碳酸氫鈉50毫克，硫酸亞鐵1.5毫克，f/2微量元素溶液1.2毫升，f/2維生素溶液1.2毫升，酵母膏8毫克，蛋白胨5毫克，DL蘋果酸10毫克，D-異抗壞血酸鈉4毫克，硅酸鉀6毫克，檸檬酸鈉6毫克，吲哚乙酸1毫克，α-萘乙酸0.1毫克，麥飯石粉5毫克，鈦溶液1毫升，920植物生長刺激素8國際單位，山梨酸鉀10毫克，海藻酸丙二醇酯10毫克，乙酸鈉4毫克，谷朊粉10毫克，羥丙基甲基纖維素3毫克，硬脂酸鎂2毫克，三聚甘油單硬脂酸酯4毫克，人尿1毫升，次氯酸鈉消毒后的純凈海水1000毫升，其中f/2微量元素溶液配方：ZnSO₄·4H₂O?23毫克，MnCl₂·4H₂O?178毫克，CuSO₄·5H₂O?10毫克，FeC₆H₅O₇·5H₂O?3.9克，Na₂MoO₄·2H₂O?7.3毫克，CoCl₂·6H₂O?12毫克，Na₂EDTA?4.35克，純水1000毫升；f/2維生素溶液配方：維生素B₁₂0.5毫克，維生素B₁100毫克，維生素H0.5毫克，純水1000毫升。

2.一種以羊糞浸出液為主要氮源培養蛋白核小球藻的方法，其特征在于具體步驟如下：

培養容器為容積為3立方米的臥式白色塑料貯水罐，一體式結構，堅固耐用，強度大，抗沖擊，市場有售，頂部有一蓋子，帶旋絲，蓋子打上3個孔，其中一個穿過電源導線，導線末端連著一個40瓦節能燈，還有一個孔插入充氣管，另一孔插入排氣管，充氣管和排氣管都是玻璃管，內徑6毫米，將塑料貯水罐先用砂濾海水洗凈，再用工業用鹽酸浸泡、消毒30分鐘，然后用冷開海水沖洗3遍，裝入權利要求1所述的培養基1800升，充氣混合10分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的蛋白核小球藻接種，接種密度20×10⁴cell/mL，蓋子上插入兩根干凈玻璃管，一根較長，90厘米，頂端露出蓋子10厘米，下端通過料管與2個散氣石連接，用以充氣(散氣石作用是形成很小的氣泡，避免大氣泡或翻滾的波浪打碎藻細胞)，另一根較短，16厘米，兩端露出蓋子即可，用以排氣，兩根玻璃管同樣粗細，用干凈的透明膠帶將兩根玻璃管固定，長的玻璃管上端用料管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣∶純二氧化碳∶氨氣＝92％∶7％∶1％，白天連續充氣，夜間行間隔充氣，即充氣30分鐘，停止30分鐘，如此反復，充氣量不宜太大，以藻細胞浮起不下沉即可，室外培養，太陽光照射，最佳溫度25±2℃，最佳光照強度3000-15000Lux，夜間打開節能燈進行照明，培養的前6天，塑料貯水罐上方搭建一簡易棚，上放置簾子遮擋光線，使光照強度維持在3000-8000Lux，避免強烈陽光對細胞造成光傷害，第7天撤掉簾子，較強的光照有利于細胞的生長繁殖和高不飽和脂肪酸的合成，培養至第8天，停止充氣，拿開蓋子，補充新鮮培養基80升，以彌補蒸發掉的水分，蓋上蓋子，充氣，繼續培養，至第10天，蛋白核小球藻密度增加至6000×10⁴cell/mL，停止培養，從底部的水龍頭將藻液放出，將塑料貯水罐用砂濾海水洗凈，加入消毒液消毒30分鐘，后進入下一輪培養；

所述消毒液由以下重量比的物質組成：每100份85％乙醇中加入以下重量份的中藥材和輔料：土荊皮30～50份、杠板歸15～25份、黃柏15～25份、苦參5～15份、艾葉5～15份、輔料3-5份；消毒液制作方法：將土荊皮、杠板歸、黃柏、苦參、艾葉分別切碎，于60-70℃下烘干，再用中藥材粉碎機分別粉碎至70目備用；分別稱取以重量份計烘干并粉碎的土荊皮30～50份、杠板歸15～25份、黃柏15～25份、苦參5～15份、艾葉5～15份，置于三角燒瓶中充分混合后，加入100份85％乙醇，浸泡48小時，200篩絹過濾，將清液靜置沉淀36小時，撇去液面漂浮物，取中上層的清液備用，在上述清液中加入輔料3-5份混合攪拌均勻得到消毒液，所述輔料為半胱氨酸鹽酸鹽、硫酸鈉、維生素C的混合物，混合比例為重量比2∶1∶1；將所述消毒液密封于黑色試劑瓶中，貼上標簽，置于4℃冰箱備用。