[發明專利]同時測定阿莫西林克拉維酸鉀血藥濃度的方法無效

申請號：	201410434466.2	申請日：	2014-08-29
公開（公告）號：	CN104345100A	公開（公告）日：	2015-02-11
發明（設計）人：	王強;張靜文;劉萍	申請（專利權）人：	四川制藥制劑有限公司
主分類號：	G01N30/02	分類號：	G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74
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摘要：
搜索關鍵詞：	同時測定阿莫西林克拉維酸鉀血藥濃度方法
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【說明書】：

技術領域

本發明是涉及醫藥生產領域，具體地，涉及一種同時測定阿莫西林克拉維酸鉀血藥濃度的方法及其制備方法。

背景技術

阿莫西林克拉維酸鉀是由β-內酰胺抑制劑克拉維酸鉀與半合成青霉素阿莫西林組成的復方制劑。阿莫西林是殺菌性廣譜抗生素，克拉維酸鉀是不可逆的廣譜β-內酰胺酶抑制劑，可有效地抑制耐藥菌產生的β-內酰胺酶。臨床上已經取得了滿意的療效。

人血漿中阿莫西林和克拉維酸鉀濃度測定方法有微生物法、HPLC-MS法，但是微生物測定法雖然不需特殊設備，但靈敏度較低，干擾因素多，不能滿足阿莫西林克拉維酸鉀動力學研究及生物等效性實驗要求。HPLC-MS法靈敏度高，但儀器昂貴且不穩定。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種同時測定阿莫西林克拉維酸鉀血藥濃度的方法，該方法采用對乙酰氨基酚為內標，將人血漿樣品用甲醇沉淀蛋白后高速離心進樣，以C18為色譜柱，以乙腈-0.05mmol/L磷酸鹽緩沖液作為流動相，紫外檢測波長為220nm，得出阿莫西林鈉和克拉維酸鉀的最低檢測濃度，本方法漸變、準確、靈敏、特異性腔、重現性好，能夠達到同時測定人血漿中阿莫西林鈉克拉維酸鉀濃度的方法。

本發明解決上述問題所采用的技術方案是：

同時測定阿莫西林克拉維酸鉀血藥濃度的方法，

（1）????配制阿莫西林鈉-克拉維酸鉀標準儲備液：含阿莫西林鈉88.3微克/ml和克拉維酸鉀45.3微克/ml；

（2）????配制對乙酰氨基酚內標溶液和磷酸二氫鉀緩沖液；

（3）????樣品預處理：取阿莫西林鈉-克拉維酸鉀標準儲備液于離心管中，加入空白血漿至215微升，精密加入10微升內標對乙酰氨基酚，漩渦振蕩10s，再精密加入200微升甲醇，漩渦振蕩15s后，4000r/min在4℃離心6min后，取上清液備用；

（4）????取步驟（3）的上清液進入色譜柱為C18，以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖液10:90作為流動相，流速：1ml/min，紫外檢測波長22nm的HPLC儀器中進行分析；

（5）????制備阿莫西林鈉-克拉維酸鉀回歸標準曲線：配制系列濃度阿莫西林鈉-克拉維酸鉀溶液照步驟（3）處理后取各系列濃度等量體積的上清液按照步驟（4）進樣分析，得阿莫西林鈉的標準曲線回歸方程為：C=8.946Y-1.362；克拉維酸鉀的標準曲線回歸方程為：C=8.946Y-1.475，其中Y為阿莫西林鈉、克拉維酸鉀與內標物峰面積比，且Y為橫坐標。?

磷酸二氫鉀緩沖液為0.05mmol/L，且pH為2.0-2.5。

照步驟（5）中的標準回歸曲線，稀釋加入空白人血漿的阿莫西林鈉-克拉維酸鉀標準儲備液得到阿莫西林鈉、克拉維酸鉀最低檢測濃度。

綜上，本發明的有益效果是：本發明方法簡便、準確、靈敏、特異性強、重現性好，可作為阿莫西林鈉-克拉維酸鉀的生物利用度和生物等效性研究的血藥濃度測定方法。

具體實施方式

下面結合實施例，對本發明作進一步地的詳細說明，但本發明的實施方式不限于此。

實施例1：

同時測定阿莫西林克拉維酸鉀血藥濃度的方法，包括以下步驟：

（1）????配制阿莫西林鈉-克拉維酸鉀標準儲備液：含阿莫西林鈉88.3微克/ml和克拉維酸鉀45.3微克/ml；

（2）????配制對乙酰氨基酚內標溶液和磷酸二氫鉀緩沖液；

磷酸二氫鉀緩沖液為0.05mmol/L，且pH為2.0-2.5。

照步驟（5）中的標準回歸曲線，稀釋加入空白人血漿的阿莫西林鈉-克拉維酸鉀標準儲備液得到阿莫西林鈉、克拉維酸鉀最低檢測濃度。

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