[發明專利]一種殺真菌鏈霉菌發酵生產恩拉霉素的培養基和補料方法

有效

• 申請號: 201410432903.7
• 申請日: 2014-08-29
• 公開（公告）號: CN104195203B
• 公開（公告）日: 2017-09-12
• 發明（設計）人: 任勇;奇乃;李小萍;董媛
• 申請（專利權）人: 寧夏泰瑞制藥股份有限公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12R1/465
• 代理公司: 寧夏專利服務中心64100
• 代理人: 徐淑芬

技術領域

本發明屬于發酵技術領域，特別是涉及一種殺真菌鏈霉菌發酵生產恩拉霉素的培養基和補料方法。

背景技術

恩拉霉素(enramycin)是由殺真菌鏈霉菌發酵而得，是不飽和脂肪酸與十幾種氨基酸結合的多肽類抗生素，主要組分有恩拉霉素A和恩拉霉素B，主要是以鹽酸鹽形式應用。目前，國內恩拉霉素的發酵生產采用二級發酵模式，該方式存在的主要問題有以下幾點：

1 恩拉霉素發酵水平較低，其發酵單位低于8000u/ml。

2 國內發酵生產恩拉霉素的培養基中加入葡萄糖，經高溫滅菌，易導致部分葡萄糖碳化，降低總糖含量，影響發酵液質量。

3 恩拉霉素發酵生產所需的原材料采購成本較高，特別是恩拉霉素培養基中常用的有機氮源市場價格較高，提高發酵成本，降低市場競爭力。

4 國內恩拉霉素的發酵培養周期較長，一般在260h以上，導致能耗較高。

發明內容

本發明的目的就在于克服上述現有技術的缺陷，提供一種有效提高發酵單位，降低生產成本，實現恩拉霉素穩定、高效的生產的殺真菌鏈霉菌發酵生產恩拉霉素的培養基；

本發明的另一目的是提供上述殺真菌鏈霉菌發酵生產恩拉霉素的補料方法。

為實現上述目的所采取的技術方案為：

一種殺真菌鏈霉菌發酵生產恩拉霉素的培養基，包括種子培養基和發酵培養基，其特征在于所述種子培養基組成為：玉米油15～20ml/L、α-乳糖5～10g/L、乳糖酶0.01～0.03g/L、配方魚粉20～25g/L、啤酒酵母干渣15～20g/L、玉米漿干粉10～15g/L、蚯蚓粉5～10g/L、硫酸銨0.2～0.5g/L、輕質碳酸鈣1～5g/L；

所述發酵培養基組成為：玉米油20～30ml/L、α-乳糖20～25g/L、乳糖酶0.02～0.05g/L、配方魚粉30～40g/L、啤酒酵母干渣15～20g/L、玉米漿干粉15～20g/L、蚯蚓粉10～15g/L、硫酸銨0.3～0.7g/L、輕質碳酸鈣1～5g/L、硫酸鎂0.03～0.06g/L、硫酸鋅0.02～0.04g/L、磷酸二氫鉀0.5～0.9g/L、氯化鈉0.3～0.7g/L、氯化鉀0.2～0.5g/L、表面活性劑1.5～2.5g/L、氧載體4～7g/L。

所述配方魚粉是由魚粉、骨粉和羽毛粉按照重量比7:3:1混合而得。

所述氧載體為吐溫80或全氟化碳。

所述表面活性劑為聚氧乙烯烷基醇酰胺或甘油酯或聚甘油酯或聚乙二醇硬脂酸酯或十八烷基二羥乙基氧化胺。

利用上述培養基發酵生產恩拉霉素的補料方法，其特征是：在發酵過程中采用流加法進行補料，補料包括補培養基、補水、補硫酸銨、pH控制和補氨基酸，其中

a 補培養基：

發酵前70h不用進行補料，

發酵時間在71～90h，按照發酵培養基配方補碳源和氮源，其補入量為發酵培養基總體積的3～5%，

發酵時間在110h～130h，按照發酵培養基配方補碳源和氮源，其補入量為發酵培養基總體積的2～4%，

發酵時間在150h～180h，按照發酵培養基配方補碳源和氮源，其補入量為發酵培養基總體積的1～2%；

b 補水：

發酵前80h不用進行補水，

發酵時間在81～160h，當菌體濃度高于55%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體濃度在50～55%，每隔6～8h檢測發酵液菌體濃度，

發酵時間在161h～發酵結束，當菌體濃度高于50%，加入滅菌水，要求控制發酵液菌體濃度在40～50%，每隔6～8h檢測發酵液菌體濃度；

c 發酵過程pH控制工藝：

發酵前80h，pH不進行控制，

發酵時間在81～100h，若pH＜6.5，加入10～20%的氫氧化鈉，調節pH至6.6～6.9；若pH＞7，加入20%的硫酸銨溶液，調節pH至6.6～6.9，

發酵時間在101～180h，若pH＜6.2，加入10～20%的氫氧化鈉，調節pH控至6.3～6.6；若pH＞6.6，加入30%的硫酸銨溶液，調節pH至6.3～6.6；

d 補入氨基酸：

發酵前80h，不用補入氨基酸，

發酵在81h、130h和170h分別補入濃度為0.2～0.5mg/L的絲氨酸、半胱氨酸和精氨酸，其補入量為發酵液體積的0.1～0.3%（這一過程是分別加入這三種，還是每次加入混合液？）

e 補硫酸銨：