[發明專利]一種同時檢測玉米中產AFB1、ZEN、DON真菌的方法

無效

• 申請號: 201410432481.3
• 申請日: 2014-08-27
• 公開（公告）號: CN104152574A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 林海;焦洪超;伏春燕;宋志剛
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.一種同時檢測玉米中產黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮和嘔吐毒素真菌的方法，其特征在于所采用的引物組合為：一對針對aflR的特異性引物SEQ1和SEQ2；一對針對PKS13的特異性引物SEQ3和SEQ4；一對針對tri5的特異性引物SEQ5和SEQ6；

SEQ1：5'-GCACCCTGTCTTCCCTAACA-3'

SEQ2：5'-ACGACCATGCTCAGCAAGTA-3'

SEQ3：5'-CTGAGAAATATCGCTACACTACCGAC-3'

SEQ4：5'-CCCACTCAGGTTGATTTTCGTC-3'

SEQ5：5'-GCTGCTCATCACTTTGCTCAG-3'

SEQ6：5'-CTGATCTGGTCACGCTCATC-3'

上述引物組合的使用方法如下：

1)常規方法提取玉米樣品DNA,進行PCR反應；反應體系為：

10×Taq?PCR?Buffer(含Mg²⁺)：2.5μL；

dNTP?Mix(2.5mM?each)：2.0μL；

引物aflR、PKS13、tri5的上游引物各1.0μL，下游引物各1.0μL；

提取到的DNA：500ng；

Taq?DNA酶(5U/μL)：0.25μL；

用不含RNA酶的滅菌水定容至25μL。

多重PCR擴增程序如下：

首輪循環：預變性，94℃，2min；

中間循環：變性，94℃，30s；復性，60℃，30s；延伸，72℃，30s；進行30個循環

末輪循環：延伸，72℃，10min；

2)對步驟2)得到的PCR擴增產物進行瓊脂糖凝膠檢測:如果從樣品中擴增出192bp的產物，則待檢玉米樣品中有產生ZEN的真菌；如果從樣品中擴增出400bp的產物，則待檢玉米樣品中有產生AFB1的真菌；如果從樣品中擴增出658bp的產物，則待檢玉米樣品中有產生DON的真菌。