[發明專利]激光陣列編碼和光誘導的細胞分離方法

有效

• 申請號: 201410429735.6
• 申請日: 2014-08-28
• 公開（公告）號: CN104263644A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: 譚秋林;孫東;張曉飛;張文棟;熊繼軍;劉俊;薛晨陽;王曉龍;張洋;羅濤;李超
• 申請（專利權）人: 中北大學
• 主分類號: C12M1/42
• 分類號: C12M1/42;C12M1/34;C12M1/00
• 代理公司: 太原晉科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 14110
• 代理人: 任林芳

1.一種激光陣列編碼和光誘導的細胞分離方法，其特征在于：具體步驟為1）利用目標細胞的不同特性，對部分靶細胞進行熒光標記；

2）微流控芯片（7）包括集成在微流控芯片（7）上的細胞捕獲微孔陣列阱（7.9）；其中細胞捕獲微孔陣列阱（7.9）分別與集成在微流控芯片（7）上的樣本入口（7.2）、緩沖液入口I（7.1）、緩沖液入口II（7.3）、緩沖液入口????????????????????????????????????????????????（7.4）、緩沖液入口（7.5）、樣本出口I（7.6）、樣本出口II（7.8）和廢液出口（7.7）連接；利用微流控芯片（7）上的細胞捕獲阱將細胞捕獲，混合細胞樣品從微流控芯片中的樣本入口（7.2）進入，混合細胞流經細胞捕獲阱上方時陷落進入細胞捕獲阱，進樣結束后，將緩沖液入口（7.1）、緩沖液入口II（7.3）、緩沖液入口（7.4）和緩沖液入口（7.5）同時進緩沖液，將未被捕獲的細胞經樣本出口（7.8）收集；?

3）目標圖像獲取，運用高速CCD成像系統（9），使用激光發生器（3）對細胞進行照射，調節使用三維微動載物平臺和顯微放大成像平臺調節至攝到細胞捕獲微型陣列阱（7.9）區域及熒光顯示的細胞圖片；

4）隨后進行目標圖像處理，將用于微型陣列阱中目標細胞的檢測與識別；

5）激光陣列編碼和光誘導的細胞分離，所述的細胞捕獲微孔陣列阱（7.9）包括若干細胞捕獲阱（14），細胞捕獲阱（14）底部設有激光基底加熱區（17），激光基底加熱區（17）下側設有激光開關（18）；控制激光開關（18），從而控制是否在光纖對應的阱中產生氣泡，對應光纖的捕獲阱產生氣泡，細胞被頂起，然后將緩沖液入口（7.1）、緩沖液入口II（7.3）、緩沖液入口（7.4）和緩沖液入口（7.5）同時進緩沖液將目標細胞通過樣本出口（7.6）收集，之后將光開關全部打開，將死細胞頂起，通過樣本出口（7.8）收集。

2.根據權利要求1所述的激光陣列編碼和光誘導的細胞分離方法，其特征在于：所述的第三步中，激光發生器（3）選用藍色激發光，波長488nm。

3.根據權利要求1所述的激光陣列編碼和光誘導的細胞分離方法，其特征在于：所述第四步，?檢測和識別的過程如下：

首先對圖片進行分塊處理，將柵格區域圖片分成4x4的16個小區域，每個圖片的寬度和高度為大圖的1/4，獲得每幅圖像的4X4陣列位置信息，并記錄二進制的位置信息；

每個小區域中有一個細胞，細胞有兩種，一種為黃綠色，一種為紅色，對小區域的每個像素進行處理，若圖像顯示為黃綠色，則RGB值中G的值明顯大于R和B的值，對小區域100x100區域的10000個像素進行挨個判斷，統計出其中每個像素RGB值中G的值明顯大于R和G的個數N_i，其中i=1,2,3……?16，N_i?為各個小區域判斷為黃綠色的像素個數；

3）計算出每個小區域中綠色像素個數占總的像素個數的百分比M=N_i/10000*100%，若百分比M大于50%，則認為該區域中的細胞為黃綠色細胞，并記錄黃綠色區域的位置信息。