[發(fā)明專利]一種乙型肝炎病毒感染的小鼠模型的構(gòu)建方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410425641.1
• 申請日: 2014-08-26
• 公開（公告）號: CN104212835B
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張欣欣;劉晶;谷雷雷;韓悅;楊慧娟;謝幼華;沈忠良
• 申請（專利權(quán)）人: 張欣欣;劉晶;谷雷雷;韓悅;楊慧娟;謝幼華;沈忠良
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219
• 代理人: 張艷;李慧

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種乙型肝炎病毒感染的小鼠模型的構(gòu)建方法及其用途。本發(fā)明提供一種高ALT乙型肝炎病毒感染的小鼠模型的構(gòu)建方法，包括如下步驟：向Tlr2基因缺陷小鼠給藥HBV基因組DNA質(zhì)粒，從而構(gòu)建HBV乙型肝炎病毒感染的小鼠模型。本發(fā)明所提供的小鼠模型構(gòu)建過程相對簡單，技術(shù)手段相對容易，構(gòu)建成本低。此外，本發(fā)明所采用的HBV質(zhì)粒載體本身不具有毒性，不會誘導(dǎo)小鼠的免疫應(yīng)答，還能夠避免了嵌合體小鼠模型中存在的重癥免疫缺陷，且所得HBV感染模型具有更高的血清ALT水平和明顯的肝臟炎癥表現(xiàn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種乙型肝炎病毒感染的小鼠模型的構(gòu)建方法及其用途，并進一步涉及由所述乙型肝炎病毒感染的小鼠模型的構(gòu)建方法構(gòu)建獲得的小鼠模型及其用途。本發(fā)明所構(gòu)建的動物模型可用于HBV急性感染相關(guān)機制的體內(nèi)實驗，在HBV感染與發(fā)病機制的研究中具有很好的應(yīng)用價值。

背景技術(shù)

已有的用于HBV感染體內(nèi)實驗的小鼠模型按其構(gòu)建方法的不同分為轉(zhuǎn)基因小鼠模型、病毒載體轉(zhuǎn)染小鼠模型、嵌合體小鼠模型及尾靜脈高壓注射小鼠模型，這些方法均存在著一些問題，具體來說：

(1)轉(zhuǎn)基因小鼠模型是將HBV基因組通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)接入小鼠基因組中，能夠產(chǎn)生類似人類體內(nèi)的HBV病毒顆粒和具有傳染性，可以用于HBV致病機制的體內(nèi)研究，也可用于抗病毒藥物抑制病毒復(fù)制的相關(guān)研究，但有其先天的不足：首先，轉(zhuǎn)基因技術(shù)相對復(fù)雜且成本較高；其次，由于未知的原因，整合到小鼠基因組中的HBV基因不能產(chǎn)生cccDNA(在人類體內(nèi)cccDNA是HBV復(fù)制的天然轉(zhuǎn)錄模板)；另外，由于是轉(zhuǎn)基因的關(guān)系，小鼠的免疫系統(tǒng)是將病毒識別為自身物質(zhì)，需要再轉(zhuǎn)入特異性的T淋巴細胞才能進行相關(guān)的機體免疫研究，限制了該模型的研究應(yīng)用范圍。

(2)病毒載體轉(zhuǎn)染小鼠模型是將帶有HBV基因組的腺病毒載體轉(zhuǎn)染到小鼠體內(nèi)，通過腺病毒載體，HBV基因組可以有效地轉(zhuǎn)染入小鼠肝臟內(nèi)并復(fù)制，可以產(chǎn)生輕到中度的肝臟炎癥及血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)升高，可以用于在體內(nèi)研究免疫介導(dǎo)的病毒清除機制，同樣其也有自身的缺點，腺病毒本身具有毒性，且能誘導(dǎo)機體的免疫應(yīng)答限制了其應(yīng)用。

(3)嵌合體小鼠模型首先需要放射線照射滅活其骨髓細胞，與重癥聯(lián)合免疫缺陷鼠(SCID mice)的骨髓細胞重組作為預(yù)處理，再移植入已在體外感染HBV的人類肝組織片段構(gòu)建嵌合體小鼠模型，此外還有通過免疫缺陷的轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建嵌合體模型，如uPA\SCID小鼠，由于攜帶了人類肝細胞，所以該模型還可以用于其他嗜人肝細胞病毒重疊感染的研究，嵌合體小鼠模型構(gòu)建成本高且過程復(fù)雜，由于是重癥免疫缺陷小鼠，限制了其在疫苗及適應(yīng)性免疫應(yīng)答機制方面的應(yīng)用。

(4)尾靜脈高壓注射構(gòu)建的小鼠模型是近年來新出現(xiàn)的HBV感染動物模型，構(gòu)建過程相對簡單，易于推廣，通過小鼠的尾靜脈向小鼠體內(nèi)快速高壓注射HBV病毒基因組，跨過物種特異性屏障使HBV病毒有效的轉(zhuǎn)入小鼠的肝臟，從而構(gòu)建體內(nèi)有HBV復(fù)制的小鼠模型，而之前采用裸鼠或C57B/L小鼠構(gòu)建的小鼠模型肝臟炎癥不明顯，ALT升高不顯著。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于以上所述現(xiàn)有技術(shù)的缺點，本發(fā)明的目的在于提供一種乙型肝炎病毒感染的小鼠模型的構(gòu)建方法及其用途，并進一步提供由所述乙型肝炎病毒感染的小鼠模型的構(gòu)建方法構(gòu)建獲得的小鼠模型及其用途。本發(fā)明亦使用尾靜脈高壓注射，但采用的是Tlr2基因缺陷小鼠，克服了以上小鼠模型的不足。

為實現(xiàn)上述目的及其他相關(guān)目的，本發(fā)明第一方面提供一種高ALT乙型肝炎病毒感染的小鼠模型的構(gòu)建方法，包括如下步驟：向Tlr2基因缺陷小鼠給藥HBV基因組DNA質(zhì)粒，從而構(gòu)建HBV乙型肝炎病毒感染的小鼠模型。

優(yōu)選的，所述Tlr2基因缺陷小鼠為純合Tlr2基因缺陷(Tlr2^-/-)小鼠或雜合Tlr2基因缺陷(Tlr2^+/-)小鼠。

更優(yōu)選的，所述Tlr2基因缺陷小鼠為雜合Tlr2基因缺陷(Tlr2^+/-)小鼠。