[發明專利]一株枯草芽孢桿菌DCU及其用途

在審

• 申請號: 201410424171.7
• 申請日: 2014-08-26
• 公開（公告）號: CN104774781A
• 公開（公告）日: 2015-07-15
• 發明（設計）人: 李升康;吳慧娟;孫令斌;劉文華;胡忠;溫小波
• 申請（專利權）人: 汕頭大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K1/16;C12R1/125
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 溫旭;張澤思

本發明提供了一株枯草芽孢桿菌DCU，其保藏編號為CCTCC NO.2014118，該枯草芽孢桿菌不僅具有良好的抗病原活性，能夠很好地抑制致病菌生長繁殖，而且還能夠提高機體的免疫力，其應用前景廣泛，可以將其應用于益生菌制劑，也可以將其制成菌粉，作為飼料添加劑添加到飼料中，用來抑制動物體內致病菌生長，降低動物死亡率。

技術領域

本發明涉及一株枯草芽孢桿菌，具體涉及一株具有抑制副溶血弧菌生長能力的枯草芽孢桿菌DCU及其用途。

背景技術

擬穴青蟹(Scylla paramamosain)，簡稱青蟹，屬廣鹽廣溫性的海水經濟甲殼動物,主要分布于我國東南沿海地區,是粵東特別是汕頭主要的海水養殖品種，具有生長快、個體大、適應性和抗病能力強、耐干露、易運輸、肉味鮮美獨特、營養豐富等特點,頗受國內外生產者和消費者的青睞。近年來青蟹病害特別是病毒性病(如青蟹桿狀病毒病，呼腸孤樣病毒病)、細菌性病和寄生蟲病等給我省乃至全國青蟹養殖業造成了嚴重的經濟損失。如自2004年秋冬以來，廣東青蟹養殖發生了前所未有的突發性病害，尤其是育肥過程中，膏蟹的死亡率在70％以上。2005～2006年廣東南水青蟹育肥死亡率在90％以上。2006、2007年的病害仍然嚴重，發病情況和發病時間與前2年基本相同。4年來，僅汕頭牛田洋圍墾區群眾青蟹養殖就減產了60％，估計每年經濟損失達5000萬元以上。汕頭市青蟹養殖面積10萬余畝；其中牛田洋圍墾區3萬多畝。青蟹病害發病迅速、范圍廣，主要爆發于每年的9-11月份。

一般認為，青蟹屬甲殼類無脊椎動物，不具備特異性免疫系統，其免疫以非特異性免疫為主，故運用疫苗防治青蟹病害的可靠性和廣泛性目前尚存在爭論。迄今為止，國內外許多學者從青蟹病原、青蟹免疫防御機制和養殖環境等多方面進行了大量的研究和探索，在青蟹病害治療方面取得了許多進展，但是這些研究很難從根本上解決青蟹的病害問題。因此，尋找“以防為主”的生態學防治方法，被認為是解決目前青蟹養殖疾病，提高青蟹品質的一條有效途徑。

使用益生菌進行青蟹的生態健康養殖,是提高青蟹免疫力，預防青蟹病害特別是細菌性病害的有效途徑之一。目前已有報道的水產益生茵有乳酸茵屬、雙歧桿菌屬、弧茵屬、假單胞茵屬、芽孢桿菌、硝化茵、光合茵等。乳酸茵、芽孢桿菌、酵母茵等已作為餌料添加劑應用于水產動物，起到很好的防治疾病和增進健康的作用。為陸生生物設計的微生態制劑應用于水產養殖中，不一定能盡快成為優勢菌而進行微生態調節，而且，這些微生物很容易隨著時間而逐漸消亡。益生菌目前已應用在對蝦、貝類及其他海洋水產養殖動物上，但是適用于蝦貝的益生菌并不一定在青蟹養殖中起作用或作用效果不明顯。開發針對青蟹的益生菌種，對青蟹高密度及健康生態養殖模式意義重大。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的不足之處而提供了一株具有抑制抑制副溶血弧菌生長能力的枯草芽孢桿菌，本發明還提供了所述枯草芽孢桿菌的培養方法，以及所述枯草芽孢桿菌的用途。

為實現上述目的，所采取的技術方案：一株枯草芽孢桿菌DCU/Bacillus subtilisDCU，已于2014年4月7日保藏于中國典型培養物保藏中心(China Center for TypeCulture Collection，CCTCC)，保藏地址為中國湖北省武漢市武漢大學，其保藏編號為CCTCC NO.2014118。

本發明還提供了所述枯草芽孢桿菌的培養方法，所述培養方法為將所述枯草芽孢桿菌接種到成分為酵母提取物1g/L，蛋白胨5g/L，NaCl 34g/L，Fe₃PO₄ 0.1g/L，自然PH的培養基中，在轉速為180rpm，溫度為28℃的條件下培養12h。

優選地，上述所述培養方法為將所述枯草芽孢桿菌接種到成分為蛋白胨10g/L，牛肉膏3g/L，氯化鈉5g/L，自然pH的培養基中，在轉速為180rpm，溫度為28℃的條件下培養12h。本申請發明人發現在該培養基中所述短小芽孢桿菌生長速率及最終到達的濃度均比其在上述所述培養基中好。