[發明專利]硫酸軟骨素的制備方法

有效

• 申請號: 201410423822.0
• 申請日: 2014-08-26
• 公開（公告）號: CN104163877A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 劉榜惠
• 申請（專利權）人: 淮安麥德森制藥有限公司
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08
• 代理公司: 淮安市科翔專利商標事務所 32110
• 代理人: 韓曉斌

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種硫酸軟骨素的制備方法。

背景技術

硫酸軟骨素，英文名chondroitin?sulfate，是以動物（豬、牛、馬、羊、雞、鯊魚等）的軟骨為原料的一種高分子酸性粘多糖，其分子結構為β-D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖通過β1→3糖苷鍵形成的重復二糖單位所組成的多糖鏈。它是一種白色或微黃色粉末，吸水性強，易溶于水而成粘稠液體，不溶于酒精、丙酮、乙醚和氯仿等有機溶劑。其鹽類對熱較穩定。大量研究表明，硫酸軟骨素具有降血脂、抗動脈粥樣硬化和抗病毒性肝炎等活性，臨床中已用于防治關節炎、腎炎、神經痛、偏頭痛等。作為一類重要的生物高分子，硫酸軟骨素具有廣泛的生物活性，作為安全有效的保健食品和藥品在世界各國得到了廣泛應用。由于不同生物或者相同生物的不同組織所含硫酸軟骨素的種類和量均不同，使其結構與活性復雜多樣。作為成品的硫酸軟骨素應盡可能的去除雜質，特別是影響產品溶液澄清度的雜質。

目前，硫酸軟骨素通常提取純化方法是采用酶解法、樹脂吸附法以及醇沉法，主要包括以下步驟：

1）堿提、酶解：原料（軟骨）加水浸沒，用氫氧化鈉調PH8.5，升溫至55-60℃，保溫4-6小時，然后加入2%的堿性蛋白酶，保持PH8.5，保溫55-60℃攪拌6-8小時，升溫至沸騰15分鐘左右，過濾，得濾液；

2）樹脂吸附：濾液經201型陰離子樹脂吸附，洗脫，收集洗脫液；

3）酒精沉淀：洗脫液中按體積的2.5倍加入95%酒精，靜止8小時，取沉淀；

4）脫色：按沉淀：水的重量比為1：20的比例混合水，同時加入3%重量的氯化鈉，調PH9-12，加入2-4%重量雙氧水，6-12小時，過濾，取濾液；

5）酒精沉淀、干燥：濾液調PH6，加入體積的1-2.5倍量酒精第二次沉淀，沉淀再用95%酒精脫水兩次，干燥粉碎得到硫酸軟骨素成品。

硫酸軟骨素生產過程中主要應用酶解、樹脂吸附、醇沉、氧化脫色方法將硫酸軟骨素純化，在此過程中仍然有部分原輔料帶入的有機雜質不能夠完全去除，影響產品溶液澄清度以及色澤。?

發明內容

本發明的目的在于：提供一種硫酸軟骨素的制備方法，有效提高產品溶液澄清度以及色澤，操作過程簡單，條件容易控制，適合連續規模化生產。

本發明的技術解決方案是該硫酸軟骨素的制備方法包括下列步驟：

（1）水煮：軟骨原料加水浸沒，升溫至80-100℃，煮12-24小時，使附在軟骨表面的肌肉組織剝離，撈出軟骨；

（2）蒸煮：將步驟（1）得到的水煮軟骨放入釜中，100℃蒸4小時以上，上層油脂收集；

（3）酶解：將步驟（2）得到的軟化軟骨加水浸沒，按水體積的3%加氯化鈉，用堿調PH至8-9，升溫至55-60℃，再加入水重量0.4%（w/w）2079堿性蛋白酶，保持PH8-9，保溫55-60℃攪拌4-6小時，升溫至沸騰12-18分鐘，過濾；?

（4）樹脂吸附：201陰離子樹脂吸附，洗脫，收集洗脫液；

（5）酒精沉淀：將步驟（4）得到的洗脫液調PH6-7，再加入酒精使溶液酒精質量濃度達到60%，沉淀16小時以上；

（6）脫色：將步驟（5）得到的沉淀物用水溶解，升溫至40-60℃，調PH至8-9，加入水體積的1-3%雙氧水；

（7）除雜：將步驟（6）的脫色溶液降溫至0-30℃，用鹽酸調PH1-4，加入脫色溶液體積的0.5-3%亞硝酸鈉，攪拌1-3小時；

（8）酒精沉淀：將步驟（7）得到的除雜溶液調PH6-7，加其體積5%的氯化鈉，過濾，再加入酒精使溶液酒精質量濃度達到60%，沉淀16小時以上；

（9）脫水烘干：步驟（8）沉淀結束后棄去上層酒精，收集沉淀，脫水干燥，得硫酸軟骨素成品。

本發明的效果是：1、應用酸性條件下亞硝酸鈉與硫酸軟骨素中雜質反應生成水溶性更好的物質，而硫酸軟骨素基本結構保持完整；2、硫酸軟骨素中雜質容易去除，生產過操作簡單，適合規模化生產，效率高，產品質量穩定，產品完全符合注射劑澄清度要求。

具體實施方式

????下面結合具體實施例進一步說明本發明的技術解決方案，這些實施例不能理解為是對技術方案的限制。

實施例1：依以下步驟生產精品硫酸軟骨素

（1）水煮：100公斤軟骨原料加水浸沒，升溫至80℃，煮24小時，使附在軟骨表面的肌肉組織剝離，撈出軟骨；

（2）蒸煮：將步驟（1）得到的水煮軟骨放入釜中，100℃蒸4小時以上，上層油脂收集；