[發明專利]一種檢測TFR2 R25C基因突變的試劑及其應用

無效

• 申請號: 201410423455.4
• 申請日: 2014-08-26
• 公開（公告）號: CN104195244A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 管宇;張葉青;祝峻峰;虞勝;張曉峰;羅梅宏
• 申請（專利權）人: 上海市中醫醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 金重慶

技術領域

本發明涉及一種基因突變及此突變基因的診斷試劑，具體地說，是一種檢測TFR2?R25C基因突變的試劑及其應用。

背景技術

血色病(Hemochromatosis，HC)?是體內鐵過量沉積導致組織結構破壞和器官功能損害的疾病狀態。按病因分為原發性和繼發性兩大類。繼發性血色病多見于骨髓無效造血（如再生障礙性貧血、地中海貧血、骨髓異常增生綜合征等）或鐵攝入過多（如反復大量輸血、注射鐵劑等）。

原發性血色病又稱為遺傳性血色病（Hereditary?Hemochromatosis，HH），是一種鐵代謝紊亂性遺傳病，常見于北歐人群。鐵代謝調節基因突變導致胃腸鐵吸收增加，過多的鐵逐漸沉積在肝、心、胰等組織實質細胞，誘導氧化自由基的形成，破壞細胞內部結構，導致器官功能障礙和衰竭，甚至引起死亡。常見的臨床表現包括肝纖維化、肝硬化、肝癌、糖尿病、擴張型心肌病、心力衰竭、垂體及性腺功能減退、關節痛和皮膚色素沉著等癥狀。在線人類孟德爾遺傳數據庫（Online?Mendelian?Inheritance?in?Man，OMIM）根據不同基因突變情況將HH分為4個類型：HFE?（1型，HLA-linked?hemochromatosis）、HJV（2A型，Hemojuvelin）、HAMP（2B型，Hepcidin?antimicrobial?peptide）、TFR2（3型，Transferrin?receptor?2）和SLC40A1（4型，Feroportin）。除4型血色病外，1-3型均呈常染色體隱性遺傳方式。HFE?是第一個被確定的血色病相關基因，?C282Y（酪氨酸取代282位半胱氨酸）和H63D（天冬氨酸取代63位的組氨酸）是最主要的兩個致病性突變位點。在北歐，大約85-90%遺傳性血色病患者帶有C282Y純合突變，5%為C282Y/H63D復合突變。

TFR2相關性血色病呈常染色體隱性遺傳方式。TFR2突變主要包括三種類型：氨基酸缺失、點突變和無義突變。臨床表現嚴重的TFR2突變多發生前63位氨基酸，即胞漿區。Biasiotto等發現，胞漿區Val22Ile突變可能會干擾信號轉導及受體轉運而導致HH。TFR2?Gly679Aal突變發生在受體胞外結合域，它阻斷holo-Tf與TFR2結合，降低了TFR2蛋白的穩定性。而TFR2最常見的突變位點Tyr250X因產生無功能的受體蛋白，導致HH發生。近幾年，TFR2基因中新的病理性突變不斷被發現，如Gly373Asp，Asn412Ile，Arg420His，Gly430Arg，Arg678Pro，Thr740Met等，表明TFR2基因對非HFE相關性血色病的診斷具有重要作用。深入研究這些突變的致病機理，對臨床診斷和治療具有重要意義。

在我國，雖然每年均見血色病個案報道，但發病率不詳，遺傳背景不明確。個案中，進行基因分析的報道屈指可數。在國內血色病患者中，到目前為止，僅發現HJV?C321X、HFE?H63D和HFE?IVS?3?+?5T>C三例突變。血色病臨床表現復雜多樣、無特異性，國內50%以上的就診患者在初診時被誤診為肝病、糖尿病和擴張型心肌病等。遺傳性血色病在我國較罕見，誤診率高，遺傳基礎不明確。因此提供一種能有效檢測遺傳性血色病TFR2型突變基因的試劑是十分必要的。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種檢測TFR2?R25C基因突變的試劑的用途。

本發明的再一的目的是，提供SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列的用途。

本發明的另一的目的是，提供包含SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示核苷酸序列的試劑盒的用途。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：

一種檢測TFR2?R25C基因突變的試劑的用途，用于制備檢測血色病的試劑。

所述檢測TFR2?R25C基因突變的試劑包括：

(a)?DNA提取體系；

(b)?PCR擴增體系；

(c)?DNA測序體系。

所述的檢測血色病的試劑用于檢測TFR2基因exon2中c.73C>T純合突變。

為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是：

SEQ?ID?NO.1和SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列的用途，用于制備檢測血色病的試劑。

為實現上述第三個目的，本發明采取的技術方案是：