[發明專利]一種基底細胞癌易感基因SNP多態性檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201410422966.4
• 申請日: 2014-08-25
• 公開（公告）號: CN104152570A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 秦偉;徐志勇;陳進軍;張文
• 申請（專利權）人: 武漢千麥醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 武漢華旭知識產權事務所 42214
• 代理人: 劉榮

技術領域

本發明涉及一種基底細胞癌易感基因SNP多態性檢測技術，屬于分子生物學基因芯片技術領域，具體屬于體外診斷試劑領域中SNP多態性檢測方法，根據檢測結果從基因水平評估皮膚基底細胞癌發病的風險等級，并作為預防和治療皮膚基底細胞癌的方向指導。

背景技術

基底細胞癌(basal?cell?carcinima,BCC)又稱為基底細胞上皮瘤(basal?cell?epithelioma),由Kropecher于1903年首次報告,是最常見的皮膚惡性腫瘤之一。其常發生于皮膚曝光區,特別是面部,發生于軀干的約占10％。研究發現紫外線照射、人類乳頭瘤病毒感染、基因突變等因素與其發病密切相關。基底細胞癌患者，較易出現區域淋巴結轉移，近年來圍繞基底細胞癌的研究越來越受到重視。

有關基因突變與基底細胞癌之間的關系研究報道很多，目前MnSOD、P53、SMO等基因的遺傳易感性與基底細胞癌有密切的關系。

超氧化物歧化酶(superoxide?dismutase，SOD)是一種強氧化性、清除自由基金屬離子的蛋白質。Shimoda?Matsubayashi等(Shimoda-Matsubayashi?S?et?al,1996.Methods?in?Molecular?Biology,Volume?554,2009,pp?233-249)報告，編碼錳超氧化物歧化酶(MnSOD)信號肽的基因序列(又稱為線粒體靶向序列，MTS)存在遺傳多態性，即的-9位密碼子存在GTT(纈氨酸，V)和GCT(丙氨酸，A)的互換。該遺傳多態性會影響MnSOD的功能而與皮膚癌發生相關。

P53是一抑癌基因,其基因產物是一種核酸蛋白,野生型P53為細胞生長分化的調節因子,控制著細胞由G1期進入S期的通道。現已證明BCC存在P53突變,突變率約為50％～100％，國外研究證實，日光中的紫外線為導致白種人皮膚癌的主要原因之一,而過量紫外線照射引起的P53突變系其中的重要環節。紫外線過量照射,導致表皮角質形成細胞DNA損傷，P53發生突變,喪失其抑癌功能,并參與抑制細胞凋亡的過程,提示P53突變與BCC的發生、發展有關。研究發現P53基因rs78378222和rs1042522多態性位點影響P53基因的轉錄激活功能、對細胞周期的阻滯作用等，引起細胞無限制的增殖，最終導致皮膚基底細胞癌的發生。

SMO基因是Hedgehog信號轉導網絡系統中的一個成分,該網絡系統在決定胚胎誘導模式和胚胎發育時各結構細胞命運中發揮重要作用。研究表明，SMO基因rs121918348和rs121918347多態性與一些散發性的基底細胞癌的發生有關。

綜上所述，鑒于Mn-SOD、P53、SMO?3個基因與基底細胞癌的發生有著重要的關聯關系，因此，可以將這些基因做為預測和篩查皮膚基底細胞癌的潛在指標，通過對這些易感基因多態性的檢測，能在預防和治療基底細胞癌以及降低疾病的發生率方面起到重要的作用。

目前有關SNP多態性的檢測方法主要是測序法，雖然測序法是基因檢測的“金標準”，但是測序法檢測周期長，對于被檢測者來說，他們是希望越快拿到檢測結果越好，所以測序法不利于臨床上開展基底細胞癌相關基因的檢測。而且測序法成本相對還高，對患者和相關檢測機構來說，成本都很高，這進一步限制其在臨床上的應用。因此，需要一種既方便又經濟的檢測方法就迫在眉睫。

發明內容

本發明提供了一種基底細胞癌易感基因SNP多態性檢測試劑盒，解決了現有技術中的不足，本發明可以方便靈活地對單個或多個樣本進行檢測。

實現本發明上述目的所采用的技術方案為：

一種基底細胞癌易感基因SNP多態性檢測試劑盒，包括PCR反應液和DNA雜交膜條，所述的DNA雜交膜條由基質載體和探針組成，基質載體上依次固定有兩種針對Mn-SOD基因的探針、四種針對P53基因的探針和四種針對SMO基因的探針，以及兩種針對人類基因組設計的探針，所述探針均為能夠與基底細胞癌易感基因SNP位點雜交的寡核苷酸序列，所述探針的核苷酸序列分別為：

針對Mn-SOD基因rs4880C位點的探針T1：5’-GCTCCGGCTTTGGT-3’，如SEQ?ID?NO：1所示；

針對Mn-SOD基因rs4880T位點的探針T2：5’-AGCTGGCTCCGGTTT-3’，如SEQ?ID?NO：2所示；