[發明專利]用于生成抗體混合物的方法

無效

• 申請號: 201410421605.8
• 申請日: 2010-01-26
• 公開（公告）號: CN104262483A
• 公開（公告）日: 2015-01-07
• 發明（設計）人: P.帕倫;J.J.尼杰森;A.F.拉布里杰恩;J.舒爾曼;T.文克;J.范德溫克爾;S.洛夫里克斯;I.拉斯特斯
• 申請（專利權）人: 根馬布股份公司
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K16/28;C07K16/32;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 閔丹

1.一種用于在單一重組宿主細胞中生成包含兩種或更多種不同抗體的混合物的方法，包括在所述宿主細胞中表達：

a)至少一種編碼共同輕鏈的核酸構建體，和

b)兩種或更多種編碼重鏈的核酸構建體，所述兩種或更多種核酸構建體包含

b1)兩種或更多種編碼兩種或更多種不同的第一重鏈的核酸構建體，其中所述第一重鏈的每個恒定區的氨基酸序列經過修飾，使得鉸鏈區及如免疫球蛋白亞型所要求的CH區的其它區域，諸如CH3區，不含有任何在IVIG存在下或在施用于哺乳動物或人類時能夠與相同的CH區形成二硫鍵或共價或穩定非共價重鏈間鍵的氨基酸殘基，

或

b2)至少一種編碼第一重鏈的核酸構建體，其中恒定區的氨基酸序列經過修飾，使得鉸鏈區及如免疫球蛋白亞型所要求的CH區的其它區域，諸如CH3區，不含有任何能夠在IVIG存在下或在施用于哺乳動物或人類時與相同的CH區形成二硫鍵或共價或穩定非共價重鏈間鍵的氨基酸殘基，和

至少一種編碼第二重鏈的核酸構建體，其中所述第二重鏈能夠在IVIG存在下或在施用于哺乳動物或人類時與相同的CH區形成二硫鍵或共價或穩定非共價重鏈間鍵，

其中每種所述重鏈能夠與所述輕鏈配對以形成功能性抗體。

2.依照權利要求1的方法，其中所述方法包括在所述宿主細胞中表達：兩種或更多種編碼兩種或更多種不同第一重鏈的核酸構建體，其中所述第一重鏈的每個恒定區的氨基酸序列經過修飾，使得所述鉸鏈區和如免疫球蛋白亞型所要求的CH區的其它區域，諸如CH3區，不含有任何能夠在IVIG存在下或在施用于哺乳動物或人類時與相同的CH區形成二硫鍵或共價或穩定非共價重鏈間鍵的氨基酸殘基。

3.依照權利要求1的方法，其中所述方法包括在所述宿主細胞中表達：

-至少一種編碼第一重鏈的核酸構建體，其中恒定區的氨基酸序列經過修飾，使得鉸鏈區及如免疫球蛋白亞型所要求的CH區的其它區域，諸如CH3區，不含有任何能夠在IVIG存在下或在施用于哺乳動物或人類時與相同的CH區形成二硫鍵或共價或穩定非共價重鏈間鍵的氨基酸殘基，和

-至少一種編碼第二重鏈的核酸構建體，其中所述第二重鏈能夠在IVIG存在下或在施用于哺乳動物或人類時與相同的CH區形成二硫鍵或共價或穩定非共價重鏈間鍵。

4.一種用于在單一重組宿主細胞中生成包含兩種或更多種不同抗體的混合物的方法，包括在所述宿主細胞中表達

a)至少一種編碼共同輕鏈的核酸構建體，和

b)兩種或更多種編碼重鏈的核酸構建體，所述兩種或更多種核酸構建體包含

b1)兩種或更多種編碼兩種或更多種不同第一IgG4重鏈的核酸構建體，其中所述第一IgG4重鏈的每個恒定區的氨基酸序列經過修飾，使得鉸鏈區不含有任何能夠在IVIG存在下或在施用于哺乳動物或人類時與相同的CH區形成二硫鍵或共價或穩定非共價重鏈間鍵的氨基酸殘基，

或

b2)至少一種編碼第一IgG4重鏈的核酸構建體，其中恒定區的氨基酸序列經過修飾，使得鉸鏈區不含有任何能夠在IVIG存在下或在施用于哺乳動物或人類時與相同的CH區形成二硫鍵或共價或穩定非共價重鏈間鍵的氨基酸殘基，和

至少一種編碼第二重鏈的核酸構建體，其中所述第二重鏈能夠在IVIG存在下或在施用于哺乳動物或人類時與相同的CH區形成二硫鍵或共價或穩定非共價重鏈間鍵，前提是所述第二重鏈不是野生型IgG4重鏈，

其中每種所述重鏈能夠與所述輕鏈配對以形成功能性抗體。

5.依照前述權利要求中任一項的方法，其中所述至少一種編碼第一重鏈的核酸構建體包含編碼SEQ?ID?NO：5所示的CH3區的序列，但是其中所述CH3區經過修飾，從而發生了一處或多處下述的氨基酸替代：第238位Arg(R)已被Gln(Q)替換；第239位Asp(D)已被Glu(E)替換；第249位Thr(T)已被Ala(A)替換；第251位Leu(L)已被Ala(A)替換；第251位Leu(L)已被Val(V)替換；第288位Phe(F)已被Ala(A)替換；第288位Phe(F)已被Leu(L)替換；第290位Tyr(Y)已被Ala(A)替換；第292位Lys(K)已被Arg(R)替換；第292位Lys(K)已被Ala(A)替換；第302位Gln(Q)已被Glu(E)替換；和第328位Pro(P)已被Leu(L)替換。