[發明專利]一種適于香菇工廠化栽培菌種滬F2及其指紋圖譜以及栽培方法

有效

• 申請號: 201410421601.X
• 申請日: 2014-08-25
• 公開（公告）號: CN104726344B
• 公開（公告）日: 2019-10-22
• 發明（設計）人: 尚曉冬;章爐軍;張美彥;于海龍;宋春艷;譚琦
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院;上海炎地農業科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01H15/00;C12Q1/6895;A01G18/00
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達

1.一種鑒定香菇工廠化栽培菌種滬F2的方法，其具體步驟如下：

(1)菌絲培養：將香菇菌種轉接到馬鈴薯葡萄糖培養基中，23℃～25℃下避光搖瓶培養，3d～4d后收集菌絲；

(2)基因組DNA的提取：用CTAB法提取上述菌絲的基因組DNA，紫外分光光度法檢測總基因組DNA濃度和純度，調整樣品DNA的濃度一致；

(3)SSR分子標記的檢測：對上述提取的DNA進行基因SSR標記的PCR擴增，PCR擴增體系：總體積20μL，包括：10×PCR buffer 2μL，25mmol/L MgCl₂ 2μL，10mmol/L dNTP 0.4μL，5U/μL Taq DNA酶0.2μL，10μmol/L SSR標記正向引物和反向引物總體積各1.5μL，濃度20ng～30ng/μL提取的模板DNA 2μL，ddH₂O 10.4μL；

PCR反應條件：94℃5min；94℃30second，55℃30second，72℃30second，30個循環；72℃5min；

(4)電泳檢測，銀染，顯色，拍照，分析結果：

采用4對SSR引物對香菇菌株進行PCR擴增，通過對照50bp DNA ladder可確定各SSR引物擴增的等位片段的數量和相對分子量，符合編號組合為：01(3+4)(1)的菌種，即可確定該菌種為香菇“滬F2”菌種；其中，所述4對SSR引物序列如下：

Le_fp0004正向引物：CCCAAAAAGGATTTCAGCAA；

反向引物：AACCGGAGTGGTGTAAGTGC；

Le_fp0007正向引物：CATTGCTCGGATCCTTCATT；

反向引物：TACCTCGTGCGGACTTTGAT；

Le_fp0008正向引物：CTCTTTGCACCCTCAACCTC；

反向引物：CAGCAGTCTCCTCTTGGCTC；

Le_fp0009正向引物：AAGCAGGTCAGAGCAGGTTC；

反向引物：ACCGAGAGCAGAGTCGAGAG；

編號組合01(3+4)(1)的含義如下表所示：