[發明專利]一種檢測G-蛋白耦聯受體對縮血管物質反應的方法

無效

• 申請號: 201410418087.4
• 申請日: 2014-08-25
• 公開（公告）號: CN104198689A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發明（設計）人: 李潔;林杰;王俊杰;徐雨佳;陽建軍;王安發;陳碧;張永東
• 申請（專利權）人: 李潔;林杰;王俊杰
• 主分類號: G01N33/50
• 分類號: G01N33/50
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

技術領域

本發明涉及一種檢測方法，具體涉及一種檢測G-蛋白耦聯受體對縮血管物質 的反應的方法。

背景技術

高血壓是嚴重危害人類健康的常見病。心排出量和外周血管阻力是血壓形成 的基本因素，而神經-體液在維持血壓穩定中起重要作用，因此，神經-體液紊亂 將導致高血壓病的發生與發展。高血壓時表現機體縮血管物質水平增加，如交感 神經活性增高釋放遞質去甲腎上腺素(noradrenaline，NE)增加，血管內皮分 泌內皮素增加，腎素-血管緊張素系統活性增高促進血管緊張素II生成，縮血管 的反應性增強，引起血管外周阻力增高和心血管重構，導致高血壓的發生和發展。 G蛋白耦聯受體是與GTP結合蛋白耦聯的一組膜表面結合蛋白，是目前已發現的 種類最多的一類受體，廣泛分布于各組織和器官，血管上的主要受體如腎上腺素 受體、血管緊張素II受體、膽堿能受體、5-羥色胺(5-hydroxytryptamin，5-HT) 受體、內皮素受體等均屬G-蛋白耦聯受體^[1]。報道中少見動物主要阻力血管，未 見高血壓病人大網膜動脈對NE、5-HT、Sarafotoxin?6c(S6c，ET_B受體選擇性 激動劑)和內皮素-1(endothelin-1，ET-1)的縮血管反應。

發明內容

1?材料與方法

1.1?動脈環的準備

原發性高血壓患者(n＝6，收縮壓SBP?150-160mmHg，舒張壓DBP?90-100 mmHg，年齡45-64歲，4名男性，2名女性，高血壓病史6-10年)，血壓正常的患 者(n＝8，SBP110-130mmHg，DBP?60-80mmHg，年齡30-54歲，4名男性，3 名女性)，患者手術原因為急性闌尾炎、急性胰腺炎或者急性腸梗阻，手術室取 出大網膜動脈，立即浸入冷Krebs液(含mM：NaCl?119、NaHCO₃15、KCl?4.6、 MgCl₂1.2、NaH₂PO₄1.2、CaCl₂1.5和葡萄糖5.5)；SHR(n＝16，尾動脈壓204± 16mmHg)，WKY大鼠(n＝16，尾動脈壓110±11mmHg)(上海思萊克實驗動物公 司)均為20周齡，體重250-300g，大鼠乙醚麻醉后斷頭處死，迅速取出腸系膜 動脈，立即浸入冷Krebs液，顯微鏡下剝離血管周圍組織，0.1％Triton?x-100 血管內灌注10s，去除血管內皮，再用緩沖液沖洗10s，當乙酰膽堿 (acetylcholine，ACh)引起的舒張率＜10％，認為內皮已被去除，將處理好的 血管切成1mm長的圓環^[2，3]，患者每份標本取9個血管環，大鼠每份標本取8個血 管環。手術前征求了患者同意并填寫知情同意書，實驗得到了倫理學會的批準。

1.2?藥物和試劑

去甲腎上腺素(NE)，普萘洛爾(propranolol，Prop)，乙酰膽堿(ACh)， 5-羥色胺(5-HT)，內皮素-1(ET-1)、Sarafotoxin?6c(S6c)，哌唑嗪(Prazosin)， 蘿芙素(Rauwolscine)，酮色林(Ketanserin)均為Sigma公司產品，由瑞典隆 德大學提供。以上試劑溶于0.1％的牛血清白蛋白，臨用以Krebs液稀釋。濃度以 浴槽中最終藥物的濃度表示。

1.3?主要儀器

數據記錄和分析系統，包括軟件Chart5.0以及硬件8通道橋式放大 器(ADInstruments?Co，Australia)；張力換能器(Grass?Instrument?Co. Quincy，Mass.，U.S.A)；恒溫浴漕(DMT，Denmark)。

1.4?體外實驗方法建立