[發明專利]GLS1酶在制備肝癌診斷試劑盒中的應用有效

申請號：	201410417730.1	申請日：	2014-08-22
公開（公告）號：	CN105372432B	公開（公告）日：	2017-10-03
發明（設計）人：	魏繼武;余德才;丁義濤;孟剛;史先彪	申請（專利權）人：	南京大學（蘇州）高新技術研究院
主分類號：	C12Q1/34	分類號：	C12Q1/34;G01N33/68;G01N33/574
代理公司：	江蘇銀創律師事務所32242	代理人：	何震花
地址：	215123 江蘇省***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	gls1 制備肝癌診斷試劑盒中的應用
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【說明書】：

所屬技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種GLS1酶的應用，具體地說，涉及GLS1酶在制備肝癌診斷試劑盒中的應用。

背景技術

肝細胞癌（肝癌）是我國常見的惡性腫瘤。治療仍以手術為主，但臨床上90%的肝癌患者在被診斷為肝癌的時候，已經失去手術機會。而且，肝切除術后5年內復發率高達80%，長期存活率仍然不高。早期診斷是提高術后生存期的最重要的策略。因此，肝癌急需早期診斷和轉移復發預測的標記物，提高肝癌的診斷率、手術率、和長期生存時間。

血清甲胎蛋白AFP升高與腫瘤復發相關，但約有40％的患者AFP為陰性，且與預后無正相關。迄今為止，尚無確定的蛋白標記能夠較準確地診斷或預示腫瘤復發轉移，也沒有評價肝癌預后的指標。因此本領域迫切需要尋找能協助肝癌早期診斷和預測肝癌病情及預后的相關基因和/或蛋白，這方面的研究對臨床治療肝癌及預防腫瘤復發具有重要意義。

腫瘤細胞為適應其快速增殖的需要對其新陳代謝過程重編程產生了兩個重要代謝途徑——有氧糖酵解（Aerobic Glycolysis）和谷氨酰胺酵解（Glutaminolysis）。腫瘤細胞即使在氧充足的條件下也將大部分的葡萄糖轉化為乳酸，為其快速增殖提供充足的能量。但這也使得進入三羧酸循環（TCA cycle）的丙酮酸比例減少，致使細胞合成代謝的原料和中間產物不充足。為了彌補這種不足，腫瘤細胞產生了一個替代途徑來補充這些中間產物，也就是谷氨酰胺酵解（Glutaminolysis）。谷氨酰胺由谷氨酰胺酶（Glutaminase, GLS）水解轉變成谷氨酸，并且進一步被谷氨酸脫氫酶（Glutamate dehydrogenase, GDH）催化產生α-酮戊二酸（α-ketoglutarate, α-KG），進入三羧酸循環（TCA cycle），進而維持細胞代謝中間產物的充足，從而形成一個以谷氨酰胺為原料進入三羧酸循環的補充代謝流，稱之為谷氨酰胺酵解。谷氨酰胺酶（Glutaminase, GLS）是谷氨酰胺酵解過程的關鍵限速酶，已有研究表明靶向GLS能夠有效的殺傷腫瘤細胞。

在人類細胞中有兩種類型的谷氨酰胺酶，即由2號染色體編碼的GLS1和由12號染色體編碼的GLS2。GLS1最早發現于腎臟（kidney-type），隨后發現也表達在腫瘤細胞中，如人類B淋巴細胞瘤，乳腺癌，胰腺癌，膠質細胞瘤等腫瘤細胞中GLS1表達量或活性和正常組織相比明顯增加，在大鼠和人肝癌（小樣本）中也較正常肝細胞高。GLS1基因編碼的蛋白有GAC（Glutaminase C）, KGA（kidney Glutaminase isoform）等。我們研究發現，在肝癌患者肝癌組織切片中GLS1的酶活性顯著高于對應的癌旁組織，并且肝癌細胞系中GLS1的酶活性也顯著高于正常肝細胞系。上述結果提示，谷氨酰胺酶GLS1酶活性可能是一種潛在的肝細胞癌診斷的生物標記。

目前，世界上尚未有將谷氨酰胺酶GLS1酶活性檢測應用于肝細胞癌診斷的報道。

發明內容

本發明的目的在于提供GLS1酶的新應用，特別是在制備肝癌診斷試劑盒中的應用。

本發明提供一種基于GLS1酶活性檢測的肝癌早期診斷方法和應用。該方法和應用主要包括：

（1）提供診斷試劑盒臨床檢測所需的試劑以及可靠操作流程。

（2）臨床可疑肝癌病例采取本診斷試劑盒檢測，進行診斷和預后評估。

（3）提供一種基于GLS1酶活性檢測的肝癌早期診斷標準。

（4）擴大樣本量驗證肝癌和其他肝臟疾病組織中GLS1酶活性檢測的情況。

（5）選擇高敏感性GLS1酶活性檢測底物。

本發明包括用于肝癌診斷的GLS1酶活檢測試劑盒。

本發明所述的檢測方法，其特異性特征是，所述的樣本均來自肝癌病人肝組織中癌組織及遠離癌巢的正常組織。

本發明具有如下的有益效果：