[發明專利]蜂王漿中三種脂肪酸含量的檢測方法及應用

有效

• 申請號: 201410417420.X
• 申請日: 2014-08-24
• 公開（公告）號: CN104155401B
• 公開（公告）日: 2017-01-11
• 發明（設計）人: 胡福良;吳雨祺;魏文挺;鄭火青
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司33200
• 代理人: 張法高,趙杭麗

技術領域

本發明屬于食品質量控制方法，涉及蜂王漿有效成分的檢測方法，特別涉及蜂王漿中3-羥基癸酸、10-羥基癸酸和癸二酸三種脂肪酸含量的檢測方法。

背景技術

蜂王漿（royal?jelly）是5～15日齡的哺育工蜂的咽下腺（subpharyngeal?gland）和上顎腺（mandibular?gland）分泌的、用以飼喂蜂王和3日齡以內工蜂、雄蜂幼蟲的漿狀物質。顏色呈乳白色或淡黃色。其氣味與口感主要是酸味和辛辣味。蜂王漿的化學組成極為復雜，含有蛋白質、多肽、碳水化合物、脂肪酸、維生素、礦物質、酸等，其中，脂質占蜂王漿干重的8%~19%，是蜂王漿中最重要的成份之一，其中游離脂肪酸占脂質的80%~90%以上，是蜂王漿抗菌、免疫調節、抗腫瘤等諸多生物學功能的物質基礎。

目前，針對蜂王漿中脂肪酸成分的檢測方法主要集中于10-羥基-2-癸烯酸（10-HDA），缺乏對其他脂肪酸成分的可靠的定量檢測方法。3-羥基癸酸、10-羥基癸酸和癸二酸均是蜂王漿中重要的功能性脂肪酸，但對這些脂肪酸的檢測方法研究大多只是定性檢測，缺乏簡便、有效、準確的定量檢測方法。因此，建立蜂王漿中這三種脂肪酸的定量測定方法對蜂王漿的質量控制體系的進一步完善有著重大的意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種蜂王漿中三種脂肪酸含量的檢測方法，所述三種脂肪酸分別為3-羥基癸酸、10-羥基癸酸和癸二酸，

本發明提供的蜂王漿中3-羥基癸酸、10-羥基癸酸和癸二酸含量的檢測方法，通過以下步驟實現：

（1）以對羥基苯甲酸甲酯、3-羥基癸酸、10-羥基癸酸和癸二酸為對照品，制成一定含量的對羥基苯甲酸甲酯、3-羥基癸酸、10-羥基癸酸和癸二酸的溶液，甲硅烷化衍生，通過氣相色譜測定其圖譜，以對羥基苯甲酸甲酯為內標物，由對羥基苯甲酸甲酯與3-羥基癸酸、10-羥基癸酸和癸二酸的特征吸收峰面積的比值和對照品的進樣量的比值繪制標準曲線；

（2）將待測蜂王漿加溶劑超聲處理，過濾得濾液，甲硅烷化衍生，制得供試品；

（3）在與步驟（1）相同的色譜條件下測定步驟（2）制得的供試品的氣相色譜圖譜，并分別計算對羥基苯甲酸甲酯、3-羥基癸酸、10-羥基癸酸和癸二酸的特征吸收峰峰面積，根據步驟（1）繪制的標準曲線、添加標準品質量和稱取蜂王漿的質量得到待測蜂王漿中3-羥基癸酸、10-羥基癸酸和癸二酸的含量。

上述步驟（1）用80%~100%乙醇溶解對羥基苯甲酸甲酯、3-羥基癸酸、10-羥基癸酸和癸二酸對照品，制成對羥基苯甲酸甲酯濃度為0.1?mg/ml~0.15?mg/ml，3-羥基癸酸濃度為0.004?mg/ml~0.05?mg/ml、10-羥基癸酸濃度為0.013?mg/ml~?0.14?mg/ml和癸二酸濃度為0.0015?mg/ml~0.025?mg/ml的對照品溶液，吸取1?ml左右對照品溶液，使用濾膜過濾，揮干溶劑，再用1~3?ml純乙醚溶解，吸取1?ml左右乙醚溶液，使用濾膜過濾，之后揮干溶劑，加入300?μl~500?μl純吡啶和80?μl~120?μl?BSTFA+TMS（99:1），50°C~70°C水浴30分鐘~60分鐘，然后使用氣相色譜檢測。

上述步驟（2）使用80%~100%乙醇制成對羥基苯甲酸甲酯濃度為0.5?mg/ml~0.75?mg/ml的內標溶液，稱取約0.5?g蜂王漿，置于容量瓶中，加入100?μl~1000?μl?0.01mol/l~0.03?mol/l鹽酸，振蕩溶解蜂王漿，精密吸取3ml~7ml的內標溶液加入容量瓶，用80%~100%乙醇稀釋至刻度，超聲15分鐘~30分鐘，制成待測溶液，吸取1?ml左右待測溶液，使用濾膜過濾，揮干溶劑，再用1?ml~3?ml純乙醚溶解，吸取1?ml乙醚溶液，使用濾膜過濾，之后揮干溶劑，加入300?μl~?500?μl純吡啶和80?μl~120?μl?BSTFA+TMS（99:1），50°C~70°C水浴30分鐘~60分鐘，然后使用氣相色譜檢測。

上述步驟（1）和步驟（3）中采用氣相色譜法的是毛細管柱氣相色譜法。