[發(fā)明專利]大豆事件MON89788和檢測它的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410414454.3
• 申請日: 2006-05-26
• 公開（公告）號: CN104328085A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: M·馬爾文;J·賴恩哈特;N·泰勒;E·迪金森
• 申請（專利權(quán)）人: 孟山都技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12Q1/68
• 代理公司: 北京市金杜律師事務(wù)所 11256
• 代理人: 孟凡宏;謝燕軍

本申請是申請日為2006年5月25日、申請?zhí)枮?00680027513.5、發(fā)明名稱為“大豆事件MON89788和檢測它的方法”的發(fā)明專利申請的分案申請。

發(fā)明背景

本申請要求2005年5月27日提交的美國臨時申請NO.60/685,584的優(yōu)先權(quán)，通過引用將其完整公開內(nèi)容合并在此。

1.發(fā)明領(lǐng)域

本發(fā)明涉及新的和獨特的轉(zhuǎn)基因大豆轉(zhuǎn)化事件，稱為MON89788，由此衍生的大豆品種，以及其植物部分、種子和產(chǎn)物。本發(fā)明還涉及用于檢測植物部分提取物或種子提取物中特異于MON89788的DNA分子存在的分析。

2.相關(guān)領(lǐng)域的說明

大豆(Glycine?max)是世界的許多區(qū)域中的重要作物。已經(jīng)將生物技術(shù)方法應(yīng)用于大豆用于改善產(chǎn)品的農(nóng)業(yè)性狀和品質(zhì)。大豆生產(chǎn)中的一種這樣的重要農(nóng)學(xué)性狀是除草劑耐受性，特別是對草甘膦除草劑的耐受性。除草劑耐受性大豆事件將是對于管理雜草有用的性狀。

N-磷酰甲基甘氨酸，也稱為草甘膦，是一種在廣譜的植物品種上具有活性的公知的除草劑。草甘膦是(Monsanto?Co.，St.Louis，MO)的活性成分，是在環(huán)境中具有理想的短半衰期的安全的除草劑。當(dāng)施用到植物表面時，草甘膦在植物中全身性地移動。由于其對莽草酸途徑的抑制，草甘膦是植物毒性的，莽草酸途徑提供了用于合成芳香族氨基酸的前體。草甘膦抑制在植物中發(fā)現(xiàn)的5-烯醇丙酮-3-磷酸莽草酸合酶(EPSPS)。

草甘膦耐受性可以通過EPSPS變體的表達來實現(xiàn)，所述EPSPS變體具有對草甘膦的更低親和性，并因而在存在草甘膦的情況下保持了它們的催化活性(美國專利NO.5,633,435；5,094,945；4,535,060和6,040,497)。在植物組織中降解草甘膦的酶(美國專利No.5,463,175)也能夠賦予對草甘膦的細胞耐受性。這些基因被用于耐受草甘膦的轉(zhuǎn)基因作物的生產(chǎn)，因而容許以作物損害的最小牽涉將草甘膦用于有效的雜草控制。例如，草甘膦耐受性已經(jīng)被遺傳工程化到玉米(美國專利No.5,554,798)、小麥(美國專利6,689,880)、棉花(美國專利6,740,488)、大豆(WO?9200377)和canola(美國專利申請20040018518)中。關(guān)于草甘膦耐受性的轉(zhuǎn)基因以及關(guān)于對其他除草劑耐受性的轉(zhuǎn)基因，例如bar基因(Toki?et?al.，1992；Thompson?et?al.，1987；phosphinothricin轉(zhuǎn)乙酰酶(DeBlock?et?al.，1987)，關(guān)于對glufosinate除草劑的耐受性)作為可選擇標(biāo)記物或可計分標(biāo)記物也是有用的，并且可以提供有用的表型，用于選擇與其他農(nóng)業(yè)上有用性狀聯(lián)系的植物。

已知在植物中外源基因表達受到它們的染色體位置的影響，也許是由于染色質(zhì)結(jié)構(gòu)(例如，異染色質(zhì))或轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)元件(例如，增強子)靠近整合位點的鄰近(Weising?et?al.，1988)。為此，常常必須篩選大量的事件來鑒定以導(dǎo)入的目標(biāo)基因的最優(yōu)表達為特征的事件。例如，已經(jīng)在植物和其他有機體中觀察到在事件之中可能存在著在導(dǎo)入的基因的表達水平上的廣泛變動。在表達的空間或時間模式上也可能存在差異，例如，在各種植物組織中轉(zhuǎn)基因的相對表達的差異，其可能不相應(yīng)于根據(jù)導(dǎo)入的基因構(gòu)建體中存在的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)元件所預(yù)期的模式。為此，普遍的是生產(chǎn)數(shù)百到數(shù)千個不同的事件并從這些事件中篩選出具有用于商業(yè)目的的期望的轉(zhuǎn)基因表達水平和模式的單一事件。具有期望的轉(zhuǎn)基因表達水平或模式的事件對于利用常規(guī)育種方法通過有性異型雜交將轉(zhuǎn)基因滲入到其他的遺傳背景中是有用的。這種雜交的子代維持了原始轉(zhuǎn)化體的轉(zhuǎn)基因表達特征。這種策略被用于在許多品種中確保可靠的基因表達，這些品種很好的適應(yīng)了當(dāng)?shù)氐纳L條件。