[發明專利]一種HPLC波長切換技術同時測定諾尼果汁中多種酚酸含量的方法

有效

• 申請號: 201410413704.1
• 申請日: 2014-08-21
• 公開（公告）號: CN104374854A
• 公開（公告）日: 2015-02-25
• 發明（設計）人: 程池;陳建國;張露;李金霞;洪啟恩;譚望橋
• 申請（專利權）人: 中國食品發酵工業研究院;海南諾尼生物工程開發有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種HPLC波長切換技術同時測定諾尼果汁中多種酚酸含量的檢測方法。

背景技術

諾尼(Noni)是一種熱帶常綠多年生闊葉灌木或小喬木，又名海巴戟，海巴戟天，蘿荔。學名Morinda?citrifolia?Linn.，為茜草科巴戟天屬植物，原產于一些太平洋島嶼、東南亞和澳大利亞等地，現引種于我國海南省。諾尼果有豐富的營養和藥用價值，被人們稱為“神奇果”富含大量活性成分如多糖、酚類、黃酮類和環烯醚萜類等，具有抗腫瘤、抗氧化、增強免疫力、降血脂和保護心血管等功能，對多種疾病有預防和治療作用。

酚酸是植物多酚類物質的一類，具有獨特的保健生物活性，具有抗氧化、清除自由基，抗腫瘤、增強免疫力、保護心血管等作用，與人體健康密切相關，逐漸成為研究熱點。諾尼果汁含有豐富的多酚類活性物質，其中酚酸種類較多，目前，尚無對諾尼果汁中多種酚酸物質定性和定量的研究。因此需要建立一種測定諾尼果汁中酚酸類物質的檢測方法，為諾尼果汁功效性成分的研究提供依據。

發明內容

本發明目的在于提供一種HPLC波長切換技術同時測定諾尼果汁中多種酚酸含量的檢測方法，對諾尼果汁中酚酸類物質沒食子酸、龍膽酸、P-羥基苯甲酸、綠原酸、咖啡酸、阿魏酸同時進行測定，為諾尼果汁功效性成分的研究和產品質量的評價提供可信依據。

為實現上述目的，本發明的技術方案為：一種HPLC波長切換技術同時測定諾尼果汁中多種酚酸含量的檢測方法，采用高效液相色譜、二極管陣列檢測器波長切換技術同時對諾尼果汁中6種酚酸進行定性和定量分析，其特征在于：

本發明所述檢測6種酚酸，分別為：沒食子酸、龍膽酸、P-羥基苯甲酸、綠原酸、咖啡酸、阿魏酸。

本發明中標準品的制備方法為：

分別稱取標準品沒食子酸50mg、龍膽酸100mg、P-羥基苯甲酸500mg、綠原酸200mg、咖啡酸50mg、阿魏酸30mg，置于10?mL容量瓶中，加甲醇溶解稀釋至刻度，搖勻，即得混合標準品儲備液，于冰箱4℃避光保存。使用前，根據實驗需要將此標準儲備液用50%甲醇稀釋10-100倍，配制成系列標準混合溶液，測定前經0.22?μm微孔濾膜過濾。

本發明中樣品的制備方法為：

取15?mL諾尼果汁，每次用45mL乙酸乙酯萃取，共萃取3次，合并有機相，濃縮后，殘渣溶于1?mL50?%甲醇中，測定前樣品經0.22?μm微孔濾膜過濾，用于進樣分析。

本發明的色譜條件為：

色譜柱為Thermo?Accucore?XL?C18?(250?mm×4.6?mm，4?μm)；柱溫為30?℃；流動相A?0.95?%冰醋酸溶液；流動相B甲醇；梯度洗脫條件為0-11?min，5?%?B；?11-17min，20%?B；17-22min，30?%?B；22-50min，5%?B；流速為0.8min/mL；檢測器為Thermo?DAD-3000；檢測波長為280nm和330nm（龍膽酸、咖啡酸和阿魏酸波長切換為330nm處檢測，沒食子酸、P-羥基苯甲酸、綠原酸在280nm處檢測）。在上述色譜條件下，取標準品和樣品制備溶液分別進樣，記錄色譜圖。

本發明中所述的諾尼果汁為純諾尼果汁或含諾尼成分的其它產品。

本發明采用高效液相色譜法，通過梯度洗脫，檢測過程波長切換，同時測定諾尼果汁中6種酚酸的含量。結果6種酚酸組分的質量濃度與峰面積具有良好的線性關系；相關系數均大于0.991，且6種酚酸組分在30?min內可得到較好分離。平均回收率為91.18%～101.08?%，相對標準偏差為0.73%～2.17?%。本法快速、簡便、準確、高效，可用于同時測定諾尼果汁中沒食子酸、龍膽酸、P-羥基苯甲酸、綠原酸、咖啡酸、阿魏酸6種酚酸的含量，為諾尼果汁功效性成分的研究和產品質量的評價提供科學、可信依據。

本發明由于采用以上技術方案，具有以下優點：

1.?采用波長切換技術進行檢測，用二極管陣列檢測器綜合考慮不同酚酸組分最強吸收且雜質干擾較小的波長進行波長切換檢測。可在一張色譜圖中較好的對測定組分進行分離；去除干擾雜質，有利于組分含量準確計算，具有方便、快捷、高效、方法穩定、重現性好的優點；

2.?流動相的選擇：本發明在流動相中添加少量冰醋酸作為酸性調節劑，使分離效果和峰形得到改善。考察了0.5%-9%不同濃度冰醋酸溶液對6種酚酸的分離效果，最終流動相選擇采用A液（0.95%冰醋酸水溶液）和B液（甲醇），6種酚酸組分能較好分離，且各組分之間分離度均大于1.5；