[發(fā)明專利]一種從銀杏葉提取物中脫除和富集銀杏酸的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410413123.8
• 申請日: 2014-08-20
• 公開（公告）號: CN104189026B
• 公開（公告）日: 2017-04-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王曉;紀(jì)文華;趙恒強(qiáng);耿巖玲;馬秀麗;謝宏凱;陳凌霄
• 申請（專利權(quán)）人: 山東省分析測試中心
• 主分類號: C08F222/38
• 分類號: C08F222/38;C08F222/14;A61K36/16;C08J9/28;C08J9/26;C08F212/36;C08F220/56;C08F220/06;C08F226/06
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司37221
• 代理人: 趙妍

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從銀杏葉提取物中脫除和富集銀杏酸的方法。

背景技術(shù)

銀杏是我國特有的珍稀名貴樹種，素有“植物界的活化石”之稱，原產(chǎn)自我國，被列為國家二級保護(hù)植物。我國的銀杏葉資源占世界總量的70％，居世界第一位。國內(nèi)外對銀杏葉的有效成分的研究和報道很多，銀杏葉制劑是目前世界上應(yīng)用最為廣泛的輔助治療心腦血管疾病的天然藥物之一，療效獨(dú)特，被廣泛用于藥品、膳食補(bǔ)充劑等。

銀杏酸(Ginkgolic?Acids，簡稱GAs)是銀杏中除銀杏黃酮和銀杏內(nèi)酯外的另一具有重要生理活性的組分，存在于銀杏的葉、果和外種皮中，其中尤以外種皮中含量最高。銀杏酸是一類具有相同的藥效基團(tuán)的長鏈苯甲酸類化合物，側(cè)鏈長度為13-19個碳、雙鍵數(shù)0-3，常見的5種銀杏酸類化合物的結(jié)構(gòu)如下：

國外研究發(fā)現(xiàn)銀杏酸具有“雙重”生物活性，其中“負(fù)面”藥理活性包括致過敏作用、致癌變作用、胚胎毒性、致突變作用、腎毒性作用等，“正面”藥理活性表現(xiàn)為對多種腫瘤細(xì)胞有良好的抑制作用和抑菌作用，具有較高的藥用價值。

銀杏葉提取物在歐盟內(nèi)使用較長時間，銀杏酸作為其中一大類毒副作用成分，歐洲藥典的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不斷改版并沿續(xù)至今。歐盟于2013年嚴(yán)格限定銀杏葉提取物中銀杏酸水平在5ppm以下，《中國藥典》2010年版也限定銀杏葉提取物中銀杏酸應(yīng)在10ppm以下。企業(yè)在銀杏葉制劑生產(chǎn)過程中為使銀杏酸含量達(dá)到藥典的要求，往往采用有機(jī)溶劑萃取、柱層析分離、二氧化碳超臨界萃取、大孔吸樹脂富集等方法。CN03131915.7、CN02113531.2、CN01133794.X、CN200610093940.5、CN200710049086.7和CN201210125732.4涉及了有機(jī)溶劑萃取、交換樹脂等方法脫除銀杏葉提取物中銀杏酸的工藝。但這幾種方法工藝成本較高，操作比較繁瑣，使某些生產(chǎn)銀杏葉提取物的企業(yè)難以承受。更重要的是，在獲得合格銀杏葉提取物的過程中，銀杏酸無法同時富集制備，這對銀杏酸的藥理臨床研究無疑是巨大的資源浪費(fèi)。因此，開發(fā)一種銀杏葉提取物加工過程中同時脫除與富集銀杏酸的方法，是一項非常具有創(chuàng)新性和應(yīng)用性的系統(tǒng)研究工作，具有重要的應(yīng)用價值。

分子印跡技術(shù)是20世紀(jì)末出現(xiàn)的一種高選擇性分離技術(shù)，這種技術(shù)的基本思想是源于人們對抗體-抗原專一性的認(rèn)識，利用具有分子識別能力的聚合材料-分子印跡聚合物來分離、篩選、純化化合物的一種仿生技術(shù)。因為制備的材料有著極高的選擇性及卓越的分子識別性能，很快在固相萃取、人工酶學(xué)、手性拆分、生物傳感器、不對稱催化等方面得到了廣泛的應(yīng)用。

分子印跡聚合物是選用與印跡分子產(chǎn)生特定相互作用的功能性單體，通過共價或非共價作用在溶劑中形成印跡分子-功能單體復(fù)合物，加入交聯(lián)劑，在引發(fā)劑的引發(fā)下與帶有特殊官能團(tuán)的功能單體進(jìn)行光或熱的聚合，形成三維交聯(lián)的聚合物網(wǎng)絡(luò)，然后，用合適的溶劑除去印跡分子，在聚合物網(wǎng)絡(luò)中形成空間與化學(xué)功能與印跡分子相匹配的空穴。這種空穴與印跡分子結(jié)構(gòu)完全一樣，可對印跡分子或與之結(jié)構(gòu)相似的分子實(shí)現(xiàn)特異性的識別。因此，分子印跡技術(shù)具有構(gòu)效預(yù)知性、特異識別性和廣泛應(yīng)用性三個特點(diǎn)。

目前尚未見銀杏酸分子印跡技術(shù)的報道。主要存在以下的原因:模板“銀杏酸”價格昂貴,，考慮成本與收入，利用模板“銀杏酸”來大規(guī)模制備分子印跡聚合物是不合理的，若是使用一般的物質(zhì)代替銀杏酸，將會出現(xiàn)銀杏酸分子印跡聚合物對銀杏酸的選擇性較差，得到的銀杏總酸的純度非常低，迄今還沒有一種價格便宜的物質(zhì)來代替銀杏酸，并且得到的分子印跡聚合物選擇性強(qiáng)，可用于定向富集銀杏酸。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種從銀杏葉提取物中脫除和富集銀杏酸的方法，該方法在脫除銀杏酸的同時，將銀杏酸進(jìn)行富集純化，以實(shí)現(xiàn)銀杏葉提取物和銀杏酸的同時制備。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種從銀杏葉提取物中脫除和富集銀杏酸的方法，將銀杏酸分子印跡聚合物做柱層析填料裝柱，然后用銀杏葉提取液上柱，再用體積比環(huán)己烷/乙醇混合溶液(10：1)淋洗，流出液為脫除銀杏酸的銀杏葉提取物(小于5ppm)，最后層析柱用醇洗脫，流出液為高純度銀杏酸，其中所述醇為乙醇、異丙醇、正丙醇或正丁醇，優(yōu)選乙醇。

上述銀杏酸分子印跡聚合物的制備方法，包括以下步驟：

(1)將假模板、功能單體、交聯(lián)劑、引發(fā)劑、制孔劑按質(zhì)量比為1～3:2～6:15～30:0.05～0.10:20～70加入到反應(yīng)釜中混合；