[發(fā)明專利]編碼雙峰駝己糖激酶-Ⅱ的核苷酸序列、所編碼己糖激酶-Ⅱ及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410410751.0
• 申請日: 2014-08-19
• 公開（公告）號: CN104388445A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳鋼糧;吉日木圖
• 申請（專利權(quán)）人: 新疆旺源駝奶實(shí)業(yè)有限公司
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N9/12;C12N15/10;C12P19/02
• 代理公司: 北京鼎佳達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11348
• 代理人: 王偉鋒;劉鐵生

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及編碼雙峰駝己糖激酶-Ⅱ的核苷酸序列、所編碼己糖激酶-Ⅱ，以及己糖激酶-Ⅱ的應(yīng)用。

背景技術(shù)

己糖激酶(Hexokinase，HK)是調(diào)控細(xì)胞糖酵解的關(guān)鍵酶，能將葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖，為腫瘤細(xì)胞提供能量以及物質(zhì)合成所必需的重要碳源，從而促進(jìn)惡性腫瘤的生長和增殖。在HK的4種同工酶中，己糖激酶-Ⅱ(HK-Ⅱ)在腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，在多種常見惡性腫瘤組織內(nèi)呈高表達(dá)狀態(tài)并且活性增強(qiáng)。HK-Ⅱ主要存在于骨骼肌和脂肪組織中,在胰島素介導(dǎo)的葡萄糖磷酸化過程中起著重要的作用。

Giacchetti?S等(2000)研究發(fā)現(xiàn)HK-II屬胰島素敏感型，正常情況下，僅在心臟、骨髂肌和脂肪組織中微量表達(dá)。Geschwind?JH等(2002)研究發(fā)現(xiàn)，HK-II除具有催化糖酵解活性的作用，還有拮抗細(xì)胞凋亡的功能。HK-II蛋白分子與VDAC、Bcl-2家族成員等構(gòu)建線粒體PTP，調(diào)控線粒體膜通透性，拮抗線粒體途徑的細(xì)胞凋亡發(fā)生。因此，HK-II是惡性腫瘤細(xì)胞生存和防御機(jī)制之一。

Mathupala?SP等(2009)研究表明腫瘤細(xì)胞高表達(dá)HK-II受多因素調(diào)控，在基因水平上，腫瘤細(xì)胞HK-II基因拷貝數(shù)增多。通過Southern?blot及熒光原位雜交分析，發(fā)現(xiàn)大鼠肝癌細(xì)胞比正常肝細(xì)胞的HK-II基因擴(kuò)增了至少5倍。Pedersen?PL等(2002)研究發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)錄水平上，HK-II基因啟動子可被葡萄糖、低氧條件、雙丁酰環(huán)磷腺苷、佛波酯、突變的p53以及胰島素等信號激活，使HK-II基因轉(zhuǎn)錄顯著提高。Ahn?KJ，Hwang?HS等(2009)研究發(fā)現(xiàn)，高表達(dá)且與線粒體連接型的HK-II促進(jìn)了腫瘤高糖酵解，準(zhǔn)備了充足的能量和前體物質(zhì)供細(xì)胞合成代謝，為腫瘤生存和增殖提供了十分有利的條件。

Ves?ergaard?H等(1995)還研究了2型糖尿病個體中骨骼肌HK-II酶的活性下降以及HK-II基因表達(dá)下降，因而推測2型糖尿病患者存在HK-II基因的遺傳缺陷。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明實(shí)施例提供一種編碼雙峰駝雙峰駝己糖激酶-Ⅱ的核苷酸序列，即提供雙峰駝中雙峰駝己糖激酶-Ⅱ基因的cDNA序列，以及由該序列編碼的雙峰駝己糖激酶-Ⅱ。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：

一方面，本發(fā)明實(shí)施例提供了一種編碼雙峰駝己糖激酶-Ⅱ的核苷酸序列，

所述核苷酸序列是序列表中SEQ?ID?NO:1第21-1861位。

或者，所述核苷酸序列為在高嚴(yán)謹(jǐn)條件下與序列表中SEQ?ID?NO:1第21-1861位的核苷酸序列雜交且編碼雙峰駝己糖激酶-Ⅱ。

或者，所述核苷酸序列與序列表中SEQ?ID?NO:1第21-1861位的核苷酸序列具有90％以上同源性且編碼雙峰駝己糖激酶-Ⅱ。

另一方面，本發(fā)明實(shí)施例還提供一種雙峰駝己糖激酶-Ⅱ，由如上所述核苷酸序列編碼。

優(yōu)選的雙峰駝己糖激酶-Ⅱ由序列表中SEQ?ID?NO:2所示的氨基酸組成；可將葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖。

或者，雙峰駝己糖激酶-Ⅱ?yàn)樾蛄斜碇蠸EQ?ID?NO:2所示的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有將葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖功能的衍生蛋白質(zhì)。

另一方面，本發(fā)明實(shí)施例還提供一種重組表達(dá)載體，包含如上所述核苷酸序列，或編碼如上所述蛋白質(zhì)。

另一方面，本發(fā)明實(shí)施例還提供一種宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主細(xì)胞含有如上所述的重組表達(dá)載體。

另一方面，本發(fā)明實(shí)施例還提供一種如上雙峰駝己糖激酶-Ⅱ在將葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖中的應(yīng)用。

另一方面，本發(fā)明實(shí)施例還提供一種獲取編碼雙峰駝己糖激酶-Ⅱ的核苷酸序列的方法，該方法中：

PCR的正向引物為：

SEQ?ID?NO:3:5’-ACTGCCACGGTACCTTAAAC-3’；反向引物為：

SEQ?ID?NO:4:5’-GGAGTGGGTGTCGCTGTTGA-3’。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：