[發明專利]擬穴青蟹抗菌肽SpHyastatin的制備方法與應用有效
| 申請號： | 201410410408.6 | 申請日： | 2014-08-20 |
| 公開（公告）號： | CN104151414B | 公開（公告）日： | 2017-06-20 |
| 發明（設計）人： | 王克堅;單忠國;彭會;劉杰 | 申請（專利權）人： | 廈門大學 |
| 主分類號： | C07K14/435 | 分類號： | C07K14/435;C12N15/81;A61K38/17;A61P31/04;A61P31/10;A23K20/147 |
| 代理公司： | 廈門南強之路專利事務所(普通合伙)35200 | 代理人： | 馬應森 |
| 地址： | 361005 *** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 擬穴青蟹 抗菌 sphyastatin 制備 方法 應用 | ||
1.擬穴青蟹抗菌肽SpHyastatin的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
1)擬穴青蟹抗菌肽SpHyastatin表達載體的構建：分別PCR擴增擬穴青蟹抗菌肽scygonadin基因和SpHyastatin基因，重疊PCR法獲得聯合多肽scygonadin/SpHyastatin的目的基因片段，將該片段插入pPIC9K載體中，進而得到pPIC9K-scygonadin/SpHyastatin重組表達載體；所述擬穴青蟹抗菌肽scygonadin基因的Genbank登錄號為AY864802，擬穴青蟹抗菌肽SpHyastatin基因的Genbank登錄號為JX228177；
所述聯合多肽scygonadin/SpHyastatin的基因序列為：
所述聯合多肽scygonadin/SpHyastatin的氨基酸序列為：
所述pPIC9K-scygonadin/SpHyastatin重組表達載體用于表達序列為SEQ ID No.1的擬穴青蟹抗菌肽scygonadin/SpHyastatin融合序列；
2)將步驟1)所得到的pPIC9K-scygonadin/SpHyastatin重組表達載體倒入宿主細胞，并將宿主細胞進行誘導表達，獲得表達產物；
3)分離純化步驟2)所得的表達產物，獲得純化產物融合蛋白scygonadin/SpHyastatin；
所述分離純化的方法為：先將表達產物進行離心，收集發酵上清液，透析后，再進行親和層析；
4)將步驟3)所得的純化產物融合蛋白scygonadin/SpHyastatin進行腸激酶酶切反應，得酶切反應產物；
5)分離純化步驟4)所得的酶切反應產物，獲得重組蛋白，即擬穴青蟹抗菌肽SpHyastatin。
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