[發明專利]一種從牛肝臟中提取過氧化氫酶的方法

在審

• 申請號: 201410408847.3
• 申請日: 2014-08-19
• 公開（公告）號: CN104178466A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發明（設計）人: 張春穎;楊旭錦
• 申請（專利權）人: 西藏天虹科技股份有限責任公司
• 主分類號: C12N9/08
• 分類號: C12N9/08
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 史霞

1.一種從牛肝臟中提取過氧化氫酶的方法，其特征在于，

以牛肝臟為原料提取獲得過氧化氫酶粗提液，將所得過氧化氫酶粗提液采用孔徑為0.004-0.006μm的中空纖維濾膜，以10-20L/h的流速進行超濾濃縮，收集超濾截留液得到含有高濃度過氧化氫酶的過氧化氫酶濃縮液；

此外，還包括以下步驟：

步驟一、純化，將所得過氧化氫酶濃縮液采用Sephacryl?S-200凝膠進行凝膠過濾層析，用pH值為7.0-7.8的磷酸緩沖液進行洗脫，流速為1.0-2.0L/h，收集層析洗脫液得到純化的過氧化氫酶母液；

步驟二、冷凍干燥，將所得過氧化氫酶母液經過冷凍干燥，既得所述過氧化氫酶。

2.如權利要求1所述的從牛肝臟中提取過氧化氫酶的方法，其特征在于，所述過氧化氫酶粗提液的制備方法包括以下步驟：

步驟一、搗碎勻漿，將切碎的牛肝臟和pH值為7.0-7.8的磷酸緩沖液按照體積比1∶6-10混合后，保持溫度25-30℃進行搗碎20-30min，得到牛肝勻漿；

步驟二、超聲提取，將所得牛肝勻漿進行超聲振蕩10-30min，超聲波強度為30-80W，得到牛肝過氧化氫酶勻漿；

步驟三、離心分離，將所得牛肝過氧化氫酶勻漿在10-30℃下進行離心15-25min，取上層清液既得所述過氧化氫酶粗提液。

3.如權利要求2所述的從牛肝臟中提取過氧化氫酶的方法，其特征在于，將所述超濾濃縮得到的透過液進行收集，并調節所得透過液的pH值為7.0-7.8后，可取代磷酸緩沖液與切碎的牛肝臟混合后進行搗碎勻漿。

4.如權利要求1所述的從牛肝臟中提取過氧化氫酶的方法，其特征在于，在進行凝膠過濾層析之前用pH值為7.0-7.8的磷酸緩沖液對所述凝膠柱進行沖洗。

5.如權利要求1所述的從牛肝臟中提取過氧化氫酶的方法，其特征在于，步驟二中冷凍干燥溫度為-55--60℃。

6.如權利要求2所述的從牛肝臟中提取過氧化氫酶的方法，其特征在于，離心分離的轉速為大于或等于5000rpm。

7.如權利要求2或4所述的從牛肝臟中提取過氧化氫酶的方法，其特征在于，所用磷酸緩沖液的濃度均為0.09-0.11mol/L。