[發明專利]卡他莫拉菌量子點免疫層析檢測卡及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410405743.7
• 申請日: 2014-08-18
• 公開（公告）號: CN105223353B
• 公開（公告）日: 2016-11-30
• 發明（設計）人: 胡征;楊波;董俊
• 申請（專利權）人: 董俊
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/531;G01N33/533
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 余曉雪;王敏鋒

技術領域

本發明涉及醫學檢測技術領域，具體為一種卡他莫拉菌量子點免疫層析檢測卡及其制備方法和應用。

背景技術

卡他莫拉菌(Moraxellacatarrhalis，Mc)首次發現于1896年，當時稱之為卡他微球菌(Micrococcuscatarrhalis)，爾后又稱為卡他奈瑟菌(Neisseriacatarrhalis)和卡他布蘭漢菌(Branhamellacatarrhalis)。卡他莫拉菌為革蘭氏陰性球菌,通常呈腎形雙球菌狀，偶可呈四聯狀，無鞭毛，無芽胞，一般無莢膜。其營養要求不高，普通培養基上即可生長，需氧，最適生長溫度為35℃。菌落直徑1～3mm，光滑型，灰白色，不透明，整個菌落易從培養基上刮下。較長時間培養后，菌落可呈粗糙顆粒狀，黏附在培養基表面。產氧化酶和DNA酶。對糖類均不發酵。抵抗力較強，在痰中可存活27d，65℃時可存活30min。

過去一直認為Mc是對人體無致病性的上呼吸道正常寄居菌，但是，近20多年的研究發現，該菌不僅可以引起兒童和老年人的上呼吸道感染，而且還是引起成人下呼吸道感染的重要病原菌，是兒童上頜竇炎、中耳炎、肺炎以及成人的慢性下呼吸道感染的第3位最常見致病菌，僅次于肺炎支原體和肺炎鏈球菌。已有報道該菌可引起呼吸道醫院感染爆發流行。因此，卡他莫拉菌及其所致感染日益受到人們關注，對該菌的生物學特性、流行病學、所致疾病、耐藥性以及感染的防治有了更多的認識。

臨床上由于Mc與其他呼吸道病原體引起的感染癥狀類似，因此常難以根據臨床表現、x-射線檢查等得出結論，確診往往依賴于實驗室診斷。而兒童疾病的特點是起病急、轉歸快，因此敏感、快速、實用的Mc檢測對及早進行有效的臨床干預具有非常重要的意義。

盡管Mc在全球范圍內傳播，但可用于實驗室診斷的標準化商品試劑的種類極少。目前，Mc感染的診斷方法有血清學檢測法，核酸檢測法和病原體直接檢測法。

檢測血清中McIgG、IgA、IgM抗體常用的方法有：微量免疫熒光抗體檢測(MIF)，補體結合試驗(CF)，重組酶免疫測定(rEIA)，血清補體結合一酶免疫測定試驗(SeroCF—EIA)等。然而Mc抗體的檢出只能說明該個體感染過Mc，卻不能反映體內是否仍有Mc活菌存在，并且血清學特異性抗體檢測常需要根據IgM抗體的動態結果進行判斷，需要較長的時間。同時，這些技術均存在靈敏度低、操作步驟復雜、需要專業人員操作、重復性差、檢測時間長、檢測特異性差、成本較高等缺陷，因而難以滿足臨床的實際需要。

核酸檢測包括核酸雜交和聚合酶鏈式反應(PCR)，核酸雜交檢測Mc的特異性強，但敏感性不高，主要用于PCR結果的檢測、判定，尚未直接用于臨床標本的檢測；PCR具有較高的敏感性，但PCR實驗對實驗室有特殊要求，標本處理、擴增和檢測要求嚴格，且易出現假陽性，在我國還不能作為常用的臨床診斷方法。

病原體檢測方法主要為病原分離培養法，將標本接種于血平板，35～37℃，于含5％二氧化碳(CO₂)孵箱中孵育16～20h，再根據菌落形態、革蘭染色及生化鑒定(氧化酶陽性、葡萄糖陰性，DNA酶、硝酸鹽還原酶陽性)確定為卡他莫拉菌。該法為檢測卡他莫拉菌感染的“金標準”，但其存在操作步驟復雜，檢測時間長等明顯缺陷，并不十分適合臨床應用。

因此，目前建立具高靈敏度、高特異性的卡他莫拉菌抗原快速檢測法以滿足臨床的檢測需求就顯得非常必要了。

發明內容

本發明針對背景技術中現存的幾種卡他莫拉菌在檢測方式中遇到的技術瓶頸，提出了一種具有操作簡便、檢測快速、可定量及高靈敏度等優點的卡他莫拉菌量子點免疫層析檢測卡及其制備方法和應用。

本發明的目的是通過以下技術手段來實現的：

一種卡他莫拉菌量子點免疫層析檢測卡，其特征在于：所述卡他莫拉菌量子點免疫層析檢測卡包括底板、樣品墊、結合墊、檢測層以及吸水墊；所述結合墊包被有量子點標記的抗卡他莫拉菌納米探針；所述檢測層是由帶有一條檢測線及一條質控線的固相硝酸纖維素膜構成；所述檢測線包被有鼠抗卡他莫拉菌UspA1蛋白多克隆抗體；所述質控線包被有抗兔IgG；所述檢測層粘貼在底板上；所述結合墊以及吸水墊分別設置在檢測層兩端部的上方且與檢測層部分重疊后分別與檢測層以及底板粘貼在一起；所述樣品墊設置在結合墊上方且與結合墊部分重合后分別與結合墊及底板粘貼在一起。

作為優選，本發明所采用的量子點是羧基化兩親聚合物修飾的水溶性CdSe/ZnS量子點。

作為優選，本發明所采用的抗兔IgG包括但不限于羊抗兔IgG。