[發明專利]一種淋球菌檢測用引物組、含有該引物組的試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201410404761.3
• 申請日: 2014-08-15
• 公開（公告）號: CN104131112A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發明（設計）人: 郭旭光;夏勇;江鏡全;陳瓊;劉美玲;唐曉華
• 申請（專利權）人: 廣州醫科大學附屬第三醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;宋靜娜

1.一種淋球菌檢測用引物組，其特征在于：所述引物組以淋球菌PorA基因為靶基因、基于環介導等溫擴增技術設計，所述引物組包括外引物F3、外引物B3、內引物FIP和內引物BIP，各引物的核苷酸序列分別為：

外引物F3：

CCATTGATCCTTGGGACAG

外引物B3：

CAGACCGGCATAATACACAT

內引物FIP：

GGGAATCGTAACGCACGGAAATAATGTGGCTTCGCAATTG

內引物BIP：

AGCGGCAGCATTCAATTTGTTCCTGATTACTTTCCAGCGTGA。

2.如權利要求1所述的淋球菌檢測用引物組，其特征在于：所述引物組還包括環引物FLP和環引物BLP，兩個環引物的核苷酸序列分別為：

環引物FLP：

ATACCGTCGTGGCGTTTG

環引物BLP：

CGCCTATACGCCTGCTAC。

3.一種淋球菌檢測試劑盒，其特征在于：所述淋球菌檢測試劑盒包含權利要求1或2所述的引物組。

4.如權利要求3所述的淋球菌檢測試劑盒，其特征在于：所述淋球菌檢測試劑盒還包括Bst?DNA聚合酶、反應液、顯色液和陽性對照液。

5.如權利要求4所述的淋球菌檢測試劑盒，其特征在于：

所述Bst?DNA聚合酶的濃度為6-10U/μL；

所述反應液含有：1.4～1.8mmol/LdNTP、15～25mmol/LTris-HCl、9～12mmol/LKCl、9～12mmol/L(NH₄)₂SO₄、5～8mmol/LMgSO₄、0.1～0.12體積％TritonX-100、0.8～1.2mol/L甜菜堿；

所述顯色液為SYTO-9或SYBRGreenⅠ；

所述陽性對照為淋球菌porA基因DNA片段；

所述引物組中各引物的濃度為：所述外引物F3和B3各0.15～0.25μmol/L，所述內引物FIP和BIP各1.4～1.8μmol/L；或

所述外引物F3和B3各0.15～0.25μmol/L，所述內引物FIP和BIP各1.4～1.8μmol/L，所述環引物FLP和BLP各0.7～0.9μmol/L。

6.如權利要求5所述的淋球菌檢測試劑盒，其特征在于：

所述Bst?DNA聚合酶的濃度為8U/μL；

所述反應液含有：1.6mmol/LdNTP、20mmol/LTris-HCl、10mmol/LKCl、10mmol/L(NH₄)₂SO₄、6mmol/LMgSO₄、0.1％TritonX-100、1mol/L甜菜堿；

所述顯色液為0.2μmol/L?SYTO-9；

所述引物組中各引物的濃度為：所述外引物F3和B3各0.2μmol/L，所述內引物FIP和BIP各1.6μmol/L；或

所述外引物F3和B3各0.2μmol/L，所述內引物FIP和BIP各1.6μmol/L，所述環引物FLP和BLP各0.8μmol/L。

7.如權利要求3～6中任一權利要求所述的淋球菌檢測試劑盒，其特征在于：所述淋球菌檢測試劑盒還包括穩定劑，所述穩定劑為石蠟油。

8.如權利要求1或2所述的淋球菌檢測用引物組或權利要求3～6中任一權利要求所述的淋球菌檢測試劑盒在檢測淋球菌中的應用。

9.如權利要求8所述的應用，其特征在于：包括以下步驟：

1)提取待測樣品中的DNA；

2)以步驟1)中提取的DNA為模板，進行環介導等溫擴增反應；

3)檢測擴增產物。

10.如權利要求9所述的應用，其特征在于：所述環介導等溫擴增反應的起始階段溫度為60～65℃，持續時間為25～35s；擴增循環階段溫度為60～65℃，共進行80～100個循環，每個循環的持續時間為40～60s。