[發(fā)明專利]一種結(jié)核分枝桿菌（TB）核酸檢測(cè)試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410403854.4
• 申請(qǐng)日: 2014-08-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104164507B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李望豐;肖樊;趙世源;關(guān)爾鑫;王丹;蔡一榮;曲俊杰;董博;趙雪楠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東北制藥集團(tuán)遼寧生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 沈陽(yáng)世紀(jì)藍(lán)海專利事務(wù)所(普通合伙)21232
• 代理人: 譚琦

1.一種結(jié)核分枝桿菌（TB）核酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于：試劑盒包括磁珠法核酸提取試劑盒和TB核酸擴(kuò)增試劑盒，其中磁珠法核酸提取試劑盒包括裂解結(jié)合液、漂洗液、洗脫液、磁珠液；TB核酸擴(kuò)增試劑盒包括TB-PCR反應(yīng)液、酶混合液、TB-內(nèi)標(biāo)、陰性質(zhì)控品、臨界陽(yáng)性質(zhì)控品、強(qiáng)陽(yáng)性質(zhì)控品。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種結(jié)核分枝桿菌（TB）核酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述磁珠法核酸提取試劑盒中裂解結(jié)合液組成為含有十二烷基肌氨酸鈉0.5-2.5%，Triton?X-100?0.5-2.5ml/100ml，異硫氰酸胍2-6.0mol/L,EDTA（PH7.5）1-10?mM，HCl?0.1-0.3M；所述磁珠法核酸提取試劑盒中漂洗液組成為含有Triton?X-100??0.5-2.0ml/100ml，氯化鈉0.1-0.3mol/L，60-80%乙醇；所述磁珠法核酸提取試劑盒中洗脫液組成為含有10mmol/L?Tris.HCl（PH8.3），0.01-0.05%?Prolin300；所述磁珠法核酸提取試劑盒中磁珠液組成為直徑為1μm的氧化硅超順納米磁珠，濃度為10-40mg/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種結(jié)核分枝桿菌（TB）核酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述TB核酸擴(kuò)增試劑盒中TB-PCR反應(yīng)液包括用于檢測(cè)靶基因和內(nèi)標(biāo)的探針、用于擴(kuò)增靶基因和內(nèi)標(biāo)的上游引物以及下游引物、PCR緩沖液；TB核酸擴(kuò)增試劑盒中用于檢測(cè)靶基因的探針序列為：5-ctgcccactccgaatcgtgctgacc-3（SEQ?ID?NO:1），5'端標(biāo)記為FAM熒光發(fā)生基團(tuán)，3'端標(biāo)記為BHQ1熒光淬滅基團(tuán)；用于內(nèi)標(biāo)檢測(cè)的探針序列為：5'-CAGACTCCACATCGACCCTACCCGACTGC-'3（SEQ?ID?NO:2），5'端標(biāo)記為HEX熒光發(fā)生基團(tuán)，3'端標(biāo)記為BHQ1熒光淬滅基團(tuán)；用于擴(kuò)增靶基因的上游引物序列為：5-tgcggatggtcgcagagatcc-3（SEQ?ID?NO:3）；用于擴(kuò)增靶基因的下游引物序列為：?5-agtagacgggcgacctcactg-3?（SEQ?ID?NO:4）；用于擴(kuò)增內(nèi)標(biāo)的上游引物序列為：5'-?TTCGATCTCCGTCGAACCTTG-'3（SEQ?ID?NO:5）；用于擴(kuò)增內(nèi)標(biāo)的下游引物序列為：5'-ttctcaggactccagtcgcTG-'3（SEQ?ID?NO:6）。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的一種結(jié)核分枝桿菌（TB）核酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述TB核酸擴(kuò)增試劑盒中用于檢測(cè)靶基因的探針使用濃度為5-20pmol，優(yōu)選靶基因探針使用濃度為8pmol；所述用于檢測(cè)內(nèi)標(biāo)的探針使用濃度為5-20pmol，優(yōu)選內(nèi)標(biāo)探針使用濃度為8pmol；所述用于檢測(cè)靶基因的上下游引物使用濃度為10-30pmol，優(yōu)選靶基因的上下游引物使用濃度為20pmol；所述用于檢測(cè)內(nèi)標(biāo)的引物使用濃度為5-20pmol，優(yōu)選內(nèi)標(biāo)引物使用濃度為8pmol。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種結(jié)核分枝桿菌（TB）核酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述TB核酸擴(kuò)增試劑盒中PCR緩沖液組成為30mmol/L?Tris-HCl（PH8.3），10mmol/L(NH4)₂SO₄，30mmol/L?KCl，3mmol/L?MgCl₂，0.15mmol/L?dNTPs。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種結(jié)核分枝桿菌（TB）核酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述TB核酸擴(kuò)增試劑盒中酶混合液包括熱啟動(dòng)Taq酶、尿嘧啶糖基化酶（UNG）；其中熱啟動(dòng)Taq酶的用量為3-8U/人份，尿嘧啶糖基化酶的用量為0.05-0.2U/人份。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種結(jié)核分枝桿菌（TB）核酸檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所述試劑盒中TB內(nèi)標(biāo)是將序列5'-TTCGATCTCCGTCGAACCTTGCACTCTGCATCCTGGACTCATGCTGACTGCAGACTCCACATCGACCCTACCCGACTGCTCTACTGCACTCCTGCGTCATCACgcgactggagtcctgagaa-'3（SEQ?ID?NO:7）插入到pUC18T?載體而構(gòu)成的重組體；TB內(nèi)標(biāo)質(zhì)粒使用濃度為100-500copies/次，優(yōu)選使用濃度為200copies/次。