[發明專利]一種改進的測定氨基酸含量的方法

無效

• 申請號: 201410403269.4
• 申請日: 2014-08-15
• 公開（公告）號: CN104165946A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 張玉良;陳凱松
• 申請（專利權）人: 廣州衡創測試技術服務有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 無
• 代理人: 無

1.一種改進的測定氨基酸含量的方法，其特征在于包括以下步驟：

（1）準確稱取試樣0.1000g于10ml安瓿瓶中,然后向瓿瓶中準確加1+1的鹽酸5ml,將安瓿瓶封口,冷卻后,用膠布包好安瓿瓶，防止在恒溫消化時安瓿瓶破裂，置于恒溫干燥箱中消化；

（2）消化完成后取出安瓿瓶冷卻至室溫,切開安瓿瓶,過濾消化液,立即準確移取1mL濾液于50mL容量瓶中，此時容量瓶內很多泡沫，加2-3滴乙醇消泡，然后加水稀釋至刻度；

（3）稀釋液通過0.45μm孔徑的濾膜過濾，得到的濾液待用；濾液可在4℃條件下存放4小時；

（4）標樣的稀釋處理

用pH2.20的0.07mol/L檸檬酸鈉稀釋2.5μmol/mL的標樣25倍,得濃度為0.1μmol/mL的標樣待用,所述稀釋標樣可在4℃條件下保存1個月；

（5）配制流動相

流動相A液：稱取58.8g檸檬酸鈉，溶解于2.5L水中，加乙醇210mL，加高氯酸50mL，加水稀釋至3L，將該稀釋液用60%高氯酸或4mol/L氫氧化鈉，準確調節pH值至3.20，并通過0.45mm孔徑的濾膜過濾；

流動相B液:稱取檸檬酸鈉58.8g和硼酸12.4g溶解于800mL水中,加4mol/L氫氧化鈉溶液30mL，加水稀釋至1L，將該稀釋液用60%高氯酸或4mol/L氫氧化鈉溶液調節其pH值為10.00并通過0.45μm孔徑的濾膜過濾；

流動相C液:稱取氫氧化鈉4g，加水稀釋至500mL，并通過0.45μm孔徑的濾膜過濾；以上三種流動相不用時均應在4℃環境中存放；

（6）反應液的配制

硼酸-碳酸鈉緩沖溶液：稱取122.1g無水碳酸鈉、56.4g硫酸鉀和40.7g硼酸加水至3L；

A反應液：用量筒量取500mL硼酸-碳酸鈉緩沖溶液倒入試劑瓶中，加0.2mL氯酸鈉溶液,混合均勻；

B反應液：稱取鄰苯二甲醛400mg,加乙醇7mL、2-巰基乙醇1mL、10%的十二烷基聚乙二醇醚2mL，用硼酸-碳酸鈉緩沖溶液定容至500ml；以上A、B反應液可在4℃條件下保存7天；

（7）上機分析

用微量注射器注入10μL試樣及標樣于高效液相色譜儀上進入分析,得色譜圖；根據出峰時間鑒定樣品中氨基酸的種類,將樣品峰面積與標樣對比,計算樣品中各種氨基酸含量。

2.根據權利要求1所述的改進的測定氨基酸含量的方法，其特征在于：所述步驟（1）中于消化條件為110℃恒溫干燥箱中消化12小時。

3.根據權利要求2所述的改進的測定氨基酸含量的方法，其特征在于：所述步驟（4）中標樣為17種氨基酸2.5μmol/L混標溶液。

4.根據權利要求3所述的改進的測定氨基酸含量的方法，其特征在于：所述17種氨基酸分別為：天冬氨酸、谷氨酸、絲氨酸、組氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、精氨酸、丙氨酸、酪氨酸、胱氨酸、纈氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、脯氨酸。