[發(fā)明專利]一種穩(wěn)定的同型半胱氨酸檢測試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410401473.2
• 申請(qǐng)日: 2014-08-14
• 公開（公告）號(hào): CN104198726A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李偉奇;李杰;房君江;張秀文;林清玉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海睿康生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/53
• 代理公司: 上海漢聲知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國中

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)免疫體外診斷領(lǐng)域，具體地，涉及一種穩(wěn)定的同型半胱氨酸檢測試劑盒。

背景技術(shù)

同型半胱氨酸是氨基酸半胱氨酸的異種，在旁鏈部份硫醇基(-SH)前包含一個(gè)額外的亞甲基(-CH₂-)。

1969年Mccully從遺傳性同型半胱氨酸尿癥死亡兒童尸檢中發(fā)現(xiàn)，其體循環(huán)內(nèi)存在廣泛的動(dòng)脈血栓形成及動(dòng)脈粥樣硬化(AS)的病理表現(xiàn)，由此提出高同型半胱氨酸血癥(hyperhomocysteinemia，HHCY)可導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化性血管性疾病的假說。此后，各國學(xué)者對(duì)HCY與心腦血管疾病的相關(guān)關(guān)系做了大量研究。研究結(jié)果表明，Hcy可以直接或間接導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，促進(jìn)血管平滑肌細(xì)胞增殖，影響低密度脂蛋白的氧化，增強(qiáng)血小板功能，促進(jìn)血栓形成。

血清內(nèi)同型半胱氨酸的高水平是心血管疾病及中風(fēng)的風(fēng)險(xiǎn)因素，是這種疾病的標(biāo)記。本發(fā)明正是一種檢測血清中同型半胱氨酸的試劑盒，性能優(yōu)良，檢測過程簡便，靈敏度高。

診斷方法：最早檢測同型半胱氨酸是氨基酸分析法，Ueland等測定血清中同型半胱氨酸，后經(jīng)改良，目前常用方法包括以下幾種。

同位素法：由Refsum等1985年建立的方法。該方法通過14C標(biāo)記的腺苷與HCY縮合后，經(jīng)色譜分離，液體閃爍計(jì)數(shù)放射強(qiáng)度來測HCY濃度。該方法靈敏度高，特異性強(qiáng)，但操作繁瑣且有放射污染，未能推廣使用。

色譜法：1987年Stabler首先報(bào)道了氣相色譜---質(zhì)譜法測定同型半胱氨酸。該法可同時(shí)測定半胱氨酸、蛋氨酸、胱硫醚和甲基甘氨酸等多種物質(zhì)。雖然靈敏度、特異性好，但儀器價(jià)格昂貴而不能推廣。高效液相色譜法(HPLC)是目前比較成熟且推廣使用的方法，不足之處是樣品處理、層析條件、樣品檢測及定量的諸多變異，使其難以標(biāo)準(zhǔn)化。Fiskertrand等首先于1993年用全自動(dòng)高效液相色譜法對(duì)血漿和尿液的HCY和硫醇物進(jìn)行測定。HPLC根據(jù)衍生方式(柱前或柱后衍生)、檢測方法(熒光、電化學(xué))可分為多種方法。應(yīng)用HPLC準(zhǔn)確測定同型半胱氨酸需要優(yōu)良的設(shè)備、高超的技術(shù)經(jīng)驗(yàn)和應(yīng)用HPLC方法適當(dāng)?shù)臅r(shí)間，另外選擇和制備內(nèi)部質(zhì)控也相當(dāng)重要。

免疫學(xué)法：該法應(yīng)用特異性的抗S-腺苷同型半胱氨酸單克隆技術(shù)，采用熒光偏振法或免疫法測定HCY.美國雅培公司采用全自動(dòng)熒光偏振免疫技術(shù)，用AXSYM儀器檢測HCY，反應(yīng)原理為：正常人血漿中HCY約1％以還原型存在，70％與白蛋白結(jié)合，30％形成小分子二硫化物。血漿標(biāo)本在含二硫蘇糖醇的預(yù)處理液作用下，HCY、混合的二硫化物及蛋白結(jié)合型等均被還原成游離HCY形式(tHCY)：tHCY在S-腺苷-L-同型半胱氨酸(SAH)水解酶和過量腺苷存在下，被轉(zhuǎn)換成SAH；預(yù)稀釋的SAH混合物、抗-SAH單克隆抗體及標(biāo)記的熒光S-腺苷-L-半胱氨酸示蹤物一同孵育，儀器自動(dòng)檢測偏振光的改變，即可測出標(biāo)本總HCY水平。

上述方法都存在著各自的問題，或操作繁瑣，或成本高，很難普及。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種穩(wěn)定的同型半胱氨酸檢測試劑盒。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明涉及一種穩(wěn)定的同型半胱氨酸檢測試劑盒，由試劑R1及試劑R2組成，所述試劑R1包含的各組分及濃度為：

所述試劑R2包含的各組分及濃度為：

優(yōu)選地，所述試劑R1、試劑R2中的緩沖液均為Good’s緩沖液、Tris緩沖液、甘氨酸-NaOH緩沖液、HEPES緩沖液、MES緩沖液中的一種或幾種。

優(yōu)選地，所述試劑R1、試劑R2中的緩沖液的pH均為6.0-8.0。

優(yōu)選地，所述試劑R1中的復(fù)合硫醇類還原劑為DTT、β-巰基乙醇、TCEP中的幾種混合。

優(yōu)選地，所述試劑R1、試劑R2中的表面活性劑均為吐溫20、吐溫80、曲拉通-100、十二烷基苯磺酸鈉中的一種或幾種。

優(yōu)選地，所述試劑R1、試劑R2中的穩(wěn)定劑均為牛血清白蛋白、海藻糖、蔗糖、螯合劑EDTA類中的一種。

優(yōu)選地，所述試劑R1、試劑R2中的防腐劑均為疊氮鈉或proclin?300防腐劑。