[發(fā)明專利]酶法測(cè)定血清中肌酐含量的檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410401289.8
• 申請(qǐng)日: 2014-08-14
• 公開（公告）號(hào): CN104198408A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李偉奇;陳瑛;房君江;張秀文;林清玉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海睿康生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N21/78
• 代理公司: 上海漢聲知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國(guó)中

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種酶法測(cè)定血清中肌酐(CRE)含量的檢測(cè)試劑盒。

背景技術(shù)

肌酐(creatinine，Cre)是肌肉在人體內(nèi)代謝的產(chǎn)物，每20g肌肉代謝可產(chǎn)生1mg肌酐。血中肌酐來(lái)自外源性和內(nèi)源性兩種，外源性肌酐是肉類食物在體內(nèi)代謝后的產(chǎn)物；內(nèi)源性肌酐是體內(nèi)肌肉組織代謝的產(chǎn)物。在肉類食物攝入量穩(wěn)定時(shí)，身體的肌肉代謝又沒有大的變化，肌酐的生成就會(huì)比較恒定。

血清肌酐濃度測(cè)定是評(píng)價(jià)腎小球?yàn)V過率(GFR)的有效指標(biāo)，在急性腎功能衰竭和慢性進(jìn)行性腎功能衰竭時(shí)，血清肌酐的測(cè)定有助于臨床判斷病情，特別是兒科和腎移植病人的診斷病程判斷療效觀察等，血清肌酐連續(xù)監(jiān)測(cè)的結(jié)果更具臨床參考價(jià)值但一個(gè)檢驗(yàn)指標(biāo)能否有效地應(yīng)用于臨床的前提是測(cè)定結(jié)果必須準(zhǔn)確可靠，況且血清肌酐測(cè)定值又是計(jì)算GFR的數(shù)學(xué)依據(jù)，只有其測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確和重復(fù)性好，才能保證GFR的準(zhǔn)確計(jì)算。

目前實(shí)驗(yàn)室分析測(cè)定肌酐方法有毛細(xì)管電泳法高效液相層析法電極法酶法及化學(xué)測(cè)定法(即堿性苦味酸法)，后兩種方法在臨床試驗(yàn)中較常用。

堿性苦味酸法是運(yùn)用肌酐與堿性苦味酸反應(yīng)生成橙黃色的化合物，即Jaffe反應(yīng)，在波長(zhǎng)505～520nm處檢測(cè)吸光度，吸光度值與肌酐含量成線性比。但是膽紅素在500～520nm波長(zhǎng)處也有吸收峰值，同時(shí)，在氫氧化鈉溶液中，血清中的膽紅素可轉(zhuǎn)化為膽綠素，膽綠素在波長(zhǎng)620nm可有較強(qiáng)吸收，能減弱原吸收，此影響可掩蓋Jaffe反應(yīng)的正常顯色，最終導(dǎo)致肌酐檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)偏差。有一種酶比色法的原理是以肌酐作為底物，經(jīng)肌酐亞氨水解酶催化脫氨生成甲基乙內(nèi)酰脲，氨與α-酮戊二酸和NADH在谷氨酸脫氫酶的作用生成谷氨酸，NAD和水，在340nm波長(zhǎng)下測(cè)定NADH的吸光度變化率，計(jì)算其含量。此方法雖然只需通過兩步就能完成整個(gè)反應(yīng)，但是樣品中內(nèi)源性氨成為主要干擾因素，對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的克服上述現(xiàn)有試劑盒存在的缺陷，提供一種酶法測(cè)定血清中肌酐(CRE)含量的檢測(cè)試劑盒。采用本發(fā)明的酶法測(cè)試試劑盒來(lái)檢測(cè)血清中的CRE含量，可達(dá)到操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性佳、特異性好，快速、測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠的目的。

本發(fā)明測(cè)定CRE含量的檢測(cè)原理為：采用肌酐酰胺水解酶水解肌酐產(chǎn)生肌酸，肌酸酶水解肌酸產(chǎn)生肌氨酸，肌氨酸在肌氨酸氧化酶作用下產(chǎn)生H₂O₂，進(jìn)而偶聯(lián)過氧化物酶催化的Trinder反應(yīng)比色測(cè)定，具體步驟如下：

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明涉及一種酶法檢測(cè)血清中肌酐含量的檢測(cè)試劑盒，包含試劑R1和試劑R2；所述試劑R1含有3～10g/L?pH＝7.5～8.0的緩沖液、0.2～0.5g/L乙二胺四乙酸(EDTA)、0.5～2g/L?N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)間甲苯胺鈉鹽、1‰～5‰(即：占試劑R1總重的重量百分比含量)表面活性劑、0.2～1g/L肌氨酸氧化酶、1～5KU/L抗壞血酸氧化酶、2～5KU/L肌酸酶和0.5～1g/L穩(wěn)定劑；所述試劑R2含有3～10g/L?pH＝7.5～8.0的緩沖液、0.1～0.5g/L4-氨基安替比林、0.1～0.4g/L高鐵氰化鉀、2～8g/L肌酐酶、1～6KU/L過氧化物酶和0.5～2g/L防腐劑。

優(yōu)選的，所述試劑R1、R2中包含的緩沖液分別選自三羥甲基氨基甲烷(TRIS)、丙磺酸(MOPS)、4-羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)或BICN。

優(yōu)選的，所述表面活性劑為吐溫20、吐溫80或曲拉通X-100。更優(yōu)選為吐溫20。

優(yōu)選的，所述穩(wěn)定劑為多元醇、牛血清白蛋白(BSA)或β-環(huán)糊精。

優(yōu)選的，所述多元醇包括甘露醇或丙三醇。

優(yōu)選的，所述防腐劑為聚賴氨酸、山梨酸鉀或乙酸鈉。

本發(fā)明還涉及一種前述的檢測(cè)試劑盒的使用方法，試劑R1加入樣本后37℃孵育5分鐘，讀取吸光度A₀，再加入試劑R2，37℃孵育5分鐘，讀取吸光度A₁，計(jì)算吸光度變化率ΔA＝A₁-A₀；與CRE標(biāo)準(zhǔn)品的肌酐含量與吸光度關(guān)系曲線進(jìn)行比較，得到樣本的肌酐含量。

優(yōu)選的，所述試劑R1和試劑R2的體積比為3∶1。

優(yōu)選的，所述監(jiān)測(cè)采用的主波長(zhǎng)為546nm，副波長(zhǎng)為700nm。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：