[發(fā)明專利]梅花鹿粘膜病同源滅活疫苗及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410401027.1
• 申請日: 2014-08-14
• 公開（公告）號: CN104174017A
• 公開（公告）日: 2014-12-03
• 發(fā)明（設計）人: 丁壯;董航;叢彥龍;尹仁福;母連志;張曉東;周玉龍;穆昱
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K9/107;A61P31/14
• 代理公司: 北京科億知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11350
• 代理人: 湯東鳳

技術領域

本發(fā)明涉及一種梅花鹿粘膜病同源滅活疫苗及其制備方法。

背景技術

梅花鹿粘膜病由牛病毒性腹瀉/粘膜病病毒(BVDV)引起的一種以發(fā)熱、粘膜糜爛潰瘍、白細胞減少、腹瀉、免疫耐受與持續(xù)感染、免疫抑制、先天性缺陷、咳嗽、懷孕母鹿流產(chǎn)、產(chǎn)死胎或畸形胎為主要特征的一種接觸性傳染病，嚴重影響?zhàn)B鹿業(yè)健康發(fā)展。當前制約梅花鹿產(chǎn)業(yè)快速發(fā)展的瓶頸問題一是針對梅花鹿粘膜病專用疫苗在我國尚屬空白，大多數(shù)養(yǎng)鹿場處于無免疫狀況。

滅活疫苗是指將病原生物及其代謝產(chǎn)物用物理或化學的方法使其失去毒力,但仍保留其免疫原性而制成。接種后能產(chǎn)生特異性免疫力。在機體內(nèi)不能生長繁殖,相對安全穩(wěn)定。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種梅花鹿粘膜病病同源滅活疫苗及其制備方法。

本發(fā)明所提供的梅花鹿粘膜病病同源滅活疫苗，是將胎牛腎細胞(MDBK)接種牛病毒性腹瀉/粘膜病毒(BVDV)毒株得到的病毒液滅活得到的。

本發(fā)明提供一種梅花鹿粘膜病病同源滅活疫苗油乳劑，由終濃度為0.01克/毫升的硬脂酸鋁和下述體積份數(shù)的組分組成：

油相：注射用白油??94體積份??????????司本??6體積份

水相：梅花鹿粘膜病病毒液??96體積份?????吐溫-80??4體積份

所述梅花鹿粘膜病病同源滅活疫苗為上述的疫苗。

本發(fā)明所提供的梅花鹿粘膜病病同源滅活疫苗的制備方法，是將接種牛病毒性腹瀉/粘膜病毒毒株的胎牛腎細胞培養(yǎng)增殖，進行電鏡觀察，挑選在培養(yǎng)72～144小時之間產(chǎn)生明顯病變的細胞，收集病毒液，在病毒液中加入甲醛滅活，之后將滅火后的病毒液與油劑相混合，得到梅花鹿粘膜病同源滅活疫苗。

所述方法中，所述加入甲醛的終濃度為0.15％(體積百分比濃度)。

所述方法中，所述接種牛病毒性腹瀉/粘膜病毒毒株為CC-CRB01。

所述方法中，所述胎牛腎細胞為第3～6代，所述培養(yǎng)增殖方法為細胞增殖病毒，所述培養(yǎng)的溫度為37攝氏度。

本發(fā)明提供的梅花鹿粘膜病病同源滅活疫苗油乳劑的制備方法，包括下述步驟：

1)油相制備：取注射用白油94體積份，加司本-80?6體積份，混合后，加硬脂酸鋁至濃度為0.02克/毫升，混勻滅菌；

2)水相制備：取吐溫-804體積份，滅菌，加入權利要求5-8所述的方法獲得的梅花鹿粘膜病同源滅活疫苗96體積份，振搖使吐溫-80完全溶解；

3)乳化：取步驟1)獲得的油相1與步驟2)獲得的水相按照1︰1的體積份數(shù)比攪拌混勻，得到梅花鹿粘膜病同源滅活疫苗油乳劑。

本發(fā)明的梅花鹿粘膜病同源滅活疫苗可以直接對種鹿進行免疫，預防仔鹿的粘膜病。經(jīng)過鹿場安全試驗證實，此疫苗對種鹿是安全的，對產(chǎn)仔率、仔鹿成活率影響很小。該疫苗能使免疫鹿產(chǎn)生抵抗牛病毒性腹瀉/粘膜病病毒的抗體效價水平。免疫母鹿產(chǎn)仔后代的成活率為78％～82％(用戶觀察統(tǒng)計)，其中的未成活數(shù)大都系自然淘汰數(shù)和非特異死亡數(shù)。本發(fā)明梅花鹿粘膜病病同源滅活疫苗油乳劑制備工藝獲得的油包水型油乳劑滅活苗乳化程序簡單、粘稠度適宜[用1毫升吸管(下口內(nèi)徑1.2毫米，上口內(nèi)徑2.7毫米)，吸取25攝氏度左右的疫苗1毫升，令其垂直自然流出，流出0.4毫升所需時間為6秒]。

具體實施方式

下面結合具體實例對本發(fā)明做詳細說明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。

實施例1、梅花鹿粘膜病同源滅活疫苗及其制備方法

為了安全地特異性地預防梅花鹿粘膜病這種病毒性傳染病，研制了同源滅活疫苗。其制備方法如下所述：

一、梅花鹿粘膜病病毒液的制備

1、材料

梅花鹿源牛病毒性腹瀉毒株CC-CRB01(吉林大學動物醫(yī)學學院傳染病實驗室分離鑒定)2代基礎毒種，病毒毒力為10^5.5TCID₅₀/0.1mL

CC-CRB01株病毒含量測定