[發明專利]一種羥氯喹亞麻酸酯治療腫瘤的有效性體外評價方法

無效

• 申請號: 201410395181.2
• 申請日: 2014-08-13
• 公開（公告）號: CN104165850A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 肖洪濤;廖治;田鯤;童榮生;串俊蘭;張麗娟;喻冬柯;張遠;邊原
• 申請（專利權）人: 四川省人民醫院
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N1/28;G01N1/38
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及藥物有效性的評價方法，具體涉及到一種羥氯喹亞麻酸酯治療腫瘤的有效性體外評價方法。

背景技術

藥物的安全性和有效性是藥品的基本特征。藥品有效性是藥物的重要特性，藥物對治療某種疾病的有效，是藥品存在的重要依據，藥品的有效性是藥物存在和應用的重要保證。

腫瘤是機體在各種致癌因素作用下，局部組織的某一個細胞在基因水平上失去對其生長的正常調控，導致其克隆性異常增生而形成的異常病變。羥氯喹亞麻酸酯是綜合應用腫瘤靶向前體藥物設計原理和結構拼接原理的基礎，設計合成前體藥物連接α亞麻酸和羥氯喹的新化合物，具有非常廣闊的抗腫瘤前景，對于新藥的應用，需要對其有效性進行評價。

為了解決現有技術中的上述不足，本發明提出了一種新的解決方案。

發明內容

本發明的目的是提供一種羥氯喹亞麻酸酯治療腫瘤的有效性體外評價方法。

為達上述目的，本發明所采用的技術方案是：提供一種羥氯喹亞麻酸酯治療腫瘤的有效性體外評價方法，包括：取羥氯喹亞麻酸酯溶液作為實驗組，設置9個稀釋度，稀釋倍數為2倍，最大劑量為20mmol/L；不同稀釋度的溶液均設置三組，加入腫瘤細胞后在微量培養板上分別培養24h、48h和72h，培養溫度為36℃~38℃，二氧化碳濃度為5%；培養結束后每孔加入20ul噻唑藍，然后繼續培養2h，棄其上層液體后加入150ul的二甲基亞砜，于搖床上振蕩5min~10min；其中，微量培養板每孔中加入100ul的腫瘤細胞液，腫瘤細胞液的細胞濃度為2000個/ml?~3000個/ml；

取與羥氯喹亞麻酸酯組相同的腫瘤細胞作為對照組，置于微量培養板上分別培養24h、48h和72h；培養溫度為36℃~38℃，二氧化碳濃度為5%；培養結束后每孔加入20ul噻唑藍，然后繼續培養2h，棄其上層液體后加入150ul的二甲基亞砜，于搖床上振蕩5min~10min；每孔加入100ul的腫瘤細胞液，腫瘤細胞液的細胞濃度為2000個/ml?~3000個/ml；

測量微量培養板每個孔中的液體吸光度，得到細胞活性抑制率和半抑制濃度；其中細胞活性抑制率為對照組吸光度與實驗組吸光度之差與實驗組吸光度的比值。

綜上所述，本發明具有以下優點：

本發明公開的評價方法，可以獲得藥物對不同腫瘤細胞的半抑制濃度，判斷不同劑量的羥氯喹亞麻酸酯對腫瘤細胞的抑制效果，對其有效性進行準確的評價。

具體實施方式

實驗材料：

噻唑藍，購買于美國Amresco公司；

DMEM培養基，購買于Gibco公司；

二甲基亞砜，購買于成都市科龍化工試劑廠；

腦膠質瘤細胞U87、人肺癌細胞系A549、人結直腸癌細胞系HCT116、人乳腺癌細胞系MCF-7、人肝癌細胞系HEPG2均購買于中科院上海細胞生物所。

實施例1：藥物對腦膠質瘤細胞U87的有效性評價實驗

實驗過程：

取羥氯喹亞麻酸酯溶液，設置9個稀釋度，稀釋倍數為2倍，最大劑量為20mmol/L。不同稀釋度的溶液均設置有相同的三組，加入腫瘤細胞后在微量培養板上分別培養。微量培養板每孔中加入100ul的腫瘤細胞液，腫瘤細胞液的細胞濃度為2000個/ml?~3000個/ml。

每組溶液濃度相對應，均含有9個不同濃度梯度的溶液，其中一組培養24h，一組培養48h，一組培養72h。加入藥物的腫瘤細胞在培養板上的培養溫度為37℃，二氧化碳濃度為5%。培養結束后每孔加入20ul噻唑藍，然后繼續培養2h，棄其上層液體后加入150ul的二甲基亞砜，于搖床上振蕩5min~10min。

取腦膠質瘤細胞U87作為對照組，置于微量培養板上分別培養24h、48h和72h，腫瘤細胞液的細胞濃度為2000個/ml?~3000個/ml，微量培養板上進行培養的培養基為DMEM培養基，該培養基中含有10%的滅活胎牛血清。微量培養板上的細胞培養溫度為37℃，二氧化碳濃度為5%；培養結束后每孔加入20ul噻唑藍，然后繼續培養2h，棄其上層液體后加入150ul的二甲基亞砜，于搖床上振蕩5min~10min；每孔加入100ul的腫瘤細胞液。

測量加入藥物和腫瘤細胞的微量培養板和只加入腫瘤細胞的微量培養板中每個孔的液體吸光度，通過吸光度計算細胞活性抑制率。細胞活性抑制率為對照組吸光度與實驗組吸光度之差與實驗組吸光度的比值，并按照寇式改良法得到半抑制濃度。

實施例2：藥物對人肝癌細胞系HEPG2的有效性評價實驗