[發明專利]一種誘導多能干細胞的培養基及其用途

有效

• 申請號: 201410394740.8
• 申請日: 2014-08-12
• 公開（公告）號: CN104195103B
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 周琪;王秀杰;顧奇;郝捷;韓偉方;劉鑫;王磊;王柳
• 申請（專利權）人: 中國科學院動物研究所;中國科學院遺傳與發育生物學研究所
• 主分類號: C12N5/0735
• 分類號: C12N5/0735;A61K31/704;A61P39/06;A61P35/00;A23L33/10
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司11280
• 代理人: 郭廣迅

1.人參皂苷單體Rb1在體外提高多能干細胞的誘導效率中的用途，其特征在于，將所述人參皂苷單體Rb1添加到常規的多能干細胞誘導培養基中，然后使用該培養基培養導入多能性相關基因的供體細胞，得到誘導多能干細胞。

2.根據權利要求1所述的用途，其中，所述培養基為KOSR培養基。

3.根據權利要求1或2所述的用途，其中，所述培養基中人參皂苷單體Rb1的濃度為1-100μM。

4.根據權利要求3所述的用途，其中，所述培養基中人參皂苷單體Rb1的濃度為5-100μM。

5.根據權利要求4所述的用途，其中，所述培養基中人參皂苷單體Rb1的濃度為25-100μM。

6.根據權利要求5所述的用途，其中，所述培養基中人參皂苷單體Rb1的濃度為50-75μM。

7.一種提高體外誘導多能干細胞效率的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

1)將多能性相關基因導入供體細胞；

2)將已導入多能性相關基因的供體細胞制備為單細胞懸液，使用添加人參皂苷單體Rb1的常規誘導多能干細胞的培養基培養步驟1)中導入多能性相關基因的供體細胞，得到誘導多能干細胞。

8.根據權利要求7所述的方法，其中，所述培養基為KOSR培養基。

9.根據權利要求7所述的方法，其中，所述培養基中人參皂苷單體Rb1的濃度為1-100μM。

10.根據權利要求9所述的方法，其中，所述培養基中人參皂苷單體Rb1的濃度為5-100μM。

11.根據權利要求10所述的方法，其中，所述培養基中人參皂苷單體Rb1的濃度為25-100μM。

12.根據權利要求11所述的方法，其中，所述培養基中人參皂苷單體Rb1的濃度為50-75μM。

13.根據權利要求7-12中任一項所述的方法，其中，所述方法還包括鑒定誘導多能干細胞的步驟。

14.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟1)是通過包括以下步驟的方法實現的：

a.將供體細胞接種到含有SP的10％DMEM培養液中；

b.一天后，將所述含有SP的10％DMEM培養液換成不含SP的10％DMEM，并使用含有多能性相關基因的病毒感染供體細胞；

c.24小時后，棄去含有病毒的培養液，換上含有SP的10％DMEM，隔天再換液一次；

d.自感染后第六天得到感染好的供體細胞。

15.根據權利要求14所述的方法，其中步驟a.中，所述細胞的接種密度為1.5-2×10⁴/cm²。

16.根據權利要求14所述的方法，其中步驟b.中，所述多能性相關基因為Klf4、Sox2、Nanog和Oct4。

17.根據權利要求14所述的方法，其中步驟b.中，在感染的同時，加入8μg/ml聚凝胺。

18.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述步驟2)是通過包括以下步驟的方法實現的：

Ⅰ)將已導入多能性相關基因的供體細胞制備為單細胞懸液，并接種到飼養層細胞上；

Ⅱ)將步驟Ⅰ)中接種好的細胞使用10％DMEM的培養液培養1-2天；

Ⅲ)棄去10％DMEM的培養液，使用添加人參皂苷單體Rb1的常規誘導多能干細胞的培養基培養細胞；

Ⅳ)每隔一天更換一次培養基；

Ⅴ)培養3-4天后，得到誘導多能性干細胞克隆。

19.根據權利要求18所述的方法，其中，所述培養基為KOSR培養基。

20.根據權利要求18所述的方法，其中，所述培養基中人參皂苷單體Rb1的濃度為1-100μM。

21.根據權利要求20所述的方法，其中，所述培養基中人參皂苷單體Rb1的濃度為5-100μM。

22.根據權利要求21所述的方法，其中，所述培養基中人參皂苷單體Rb1的濃度為25-100μM。