[發明專利]一種HIV?1多表位重組蛋白及其編碼基因與應用

有效

• 申請號: 201410394686.7
• 申請日: 2014-08-12
• 公開（公告）號: CN104163857B
• 公開（公告）日: 2017-02-15
• 發明（設計）人: 周育森;寇志華;楊裔;郭彥;于虹;孫世惠;趙光宇;李軍鋒
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院微生物流行病研究所
• 主分類號: C07K14/16
• 分類號: C07K14/16;A61K39/21;A61P31/18;C12N15/49;C12N15/70
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種HIV-1多表位重組蛋白及其編碼基因與應用。

背景技術

艾滋病是由人類免疫缺陷病毒(human?immunodeficiency?virus，HIV)感染所致的獲得性免疫缺陷綜合征(acquired?immunodeficiency?syndrome，AIDS)。自1981年世界報道首例艾滋病(AIDS)病例以來，短短30余年，艾滋病迅速在全球范圍內蔓延擴散，成為當今全球最大的健康危機，也是影響我國公眾健康的重要公共衛生問題。近年來，艾滋病感染在我國出現新的流行態勢，即發病率逐年增加，感染對象覆蓋不同人群，性傳播比例增多，尤其是男-男同性戀病人上升顯著，變異重組病毒在流行分離株中所占比例增多。如何有效防治HIV感染，降低發病率和病死率是我國面臨的緊迫任務。疫苗是控制HIV感染的有效手段，雖然在HIV疫苗研發方面取得了重要的進展，一種能夠同時誘導體液和細胞免疫的HIV疫苗RV144的臨床III期試驗表明，該疫苗能夠在一定程度上降低HIV的感染從而降低艾滋病的發生，但仍然沒有有效的疫苗應用于人群。應用HIV-1疫苗預防和治療HIV-1感染仍然是HIV研究的重要課題。

一種有效的HIV疫苗應該能誘導針對不同流行株、適用于不同人群，由于我國流行的HIV病毒與其它國家和地區不同，人群MHC限制性不同，在疫苗設計時應該選擇針對不同流行株和中國主要HLA亞型的HIV保護性表位，以期誘導有效的體液和細胞免疫應答。重組蛋白疫苗與核酸疫苗及活病毒載體疫苗相比具有更好的安全性，更加適于將來臨床應用。

發明內容

本發明的目的是提供一種HIV-1多表位重組蛋白及其編碼基因與應用。

本發明所提供的HIV-1多表位重組蛋白，包含在中國主要HIV-1流行株中高度保守、且為中國主要HLA亞型MHC限制性的12個HIV-1?T細胞表位，將該蛋白命名為HIV-MEP1，具體可為如下(a)或(b)或(c)所述的蛋白質：

(a)由序列表中序列1的第13-164位所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

(b)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

(c)將序列表中序列1的第13-164位所示的氨基酸序列，或序列表中序列1所示的氨基酸序列，經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加，得到的且與抗HIV-1相關的由(a)或(b)衍生的蛋白質。

其中，序列1由164個氨基酸組成，第5-10位為6個His標簽，第13-164位為HIV-1多表位蛋白。

所述HIV-MEP1蛋白在制備HIV-1疫苗中的應用也屬于本發明的保護范圍。

活性成分為所述HIV-MEP1蛋白的HIV-1疫苗也屬于本發明的保護范圍。

根據需要，所述HIV-1疫苗中還含有佐劑，具體如鋁佐劑。

所述鋁佐劑即可為氫氧化鋁佐劑，也可為磷酸鋁佐劑。在本發明中，采用的所述鋁佐劑具體為2％氫氧化鋁(InvivoGen公司，其產品目錄號為Vac-alu-250)。

在所述HIV-1疫苗中，所述HIV-MEP1蛋白與所述鋁佐劑的質量配比可為25：1。

編碼所述HIV-MEP1蛋白的核酸分子也屬于本發明的保護范圍。

所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因組DNA或重組DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA、hnRNA或tRNA等。

在本發明的一個實施例中，所述核酸分子具體為編碼所述HIV-MEP1蛋白的基因(名稱為HIV-MEG1.E)，所述HIV-MEG1.E基因為如下1)-4)中任一所述的DNA分子：

1)序列表中序列2的第37-495位所示的DNA分子；

2)序列表中序列2的第1-495位所示的DNA分子；

3)在嚴格條件下與1)或2)所限定的DNA分子雜交且編碼所述HIV-MEP1蛋白的DNA分子；

4)與1)或2)所限定的DNA分子至少具有90％以上同源性且編碼所述HIV-MEP1蛋白的DNA分子。

上述嚴格條件可為用6×SSC，0.5％SDS的溶液，在65℃下雜交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

其中，序列2由499個核苷酸組成，第13-30位編碼序列1的第5-10位所示的6個His標簽蛋白，第37-495位編碼序列1的第13-164位所示的HIV-1多表位蛋白。序列2的第1-495位編碼序列1所示的蛋白質。