[發明專利]一種高效的體外培養人臍帶間質干細胞的無血清培養體系

在審

• 申請號: 201410394557.8
• 申請日: 2014-08-12
• 公開（公告）號: CN104164405A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 鄭敦武;莫筱縈;羅晴燕;梁心田;楊燕燕;胡紅;姜莎莎;徐文靜
• 申請（專利權）人: 賽業（蘇州）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 馬偉

技術領域

本發明涉及一種生物培養基，具體地說，涉及一種高效的體外培養人臍帶間質干細胞的無血清培養體系。?

背景技術

近年來，動物細胞培養技術已從單純的實驗操作領域擴展到研究和商業利用等多個方面。許多生物技術研究和產品都離不開細胞培養。在細胞培養發展史中，培養基的發展占有重要位置。間充質干細胞是來源于中胚層的具有高度自我更新能力和多向分化潛能的成體干細胞，廣泛存在于全身結締組織和器官間質中。大量實驗證明，長期培養后的間充質干細胞具有廣泛的分化潛能，形成的終末組織包括腦、視網膜、肝、腸、脾、骨髓、血液、皮膚、軟骨等。說明間充質干細胞具有跨胚層分化的能力，且在適當的培養環境下，能誘導多種細胞分化。?

對于間充質干細胞的培養，目前還沒有統一的方案。程范軍等采用低糖DMEM培養基，根據添加胎牛血清濃度的不同而分為2%和10%血清組，得出的結論是采用低濃度血清培養體系可有效避免間充質干細胞喪失增殖分化潛力?？傊?，不同培養基、不同批次的血清、不同的pH值、不同的種植密度都會影響間充質干細胞的生長。?

目前，間充質干細胞的常規培養體系中均加入了一定比例的動物血清，常用的是胎牛血清（FBS）。血清在細胞的體外培養體系中是必不可少的，它雖能提供生長因子、結合蛋白、激素，并起一定的保護作用，但其具有以下缺陷：①?成分復雜，且含有一些不利于細胞生長的因子或毒性物質，可能會影響研究結果；②?還可能存在病原體，對臨床應用構成威脅；③?不同批次之間存在差異，導致培養結果出現差異。?

盡管目前已有很多無血清培養基，但還是含有少量的動物血清。市場上可以購買到少數幾種人間充質干細胞無血清培養基，但基本都為國外進口，其價格昂貴（>6元/mL），培養效果不理想，且僅供研究應用，不能用于人的診斷及治療。中國專利文獻CN201210350602.0，公開日2012.12.19，公開了一種間充質干細胞無血清培養基，其必要組成為IMDM、L-谷氨酰胺、碳酸氫鈉、Hepes、重組人胰島素、重組人轉鐵蛋白、重組人白蛋白、2-巰基乙醇、原兒茶酸、脂質、氨基酸、維生素、微量元素、氫化可的松、維生素C、粘接胺或重組人纖連蛋白、黃體酮、腐胺、肝素、血清素、EGF、b-FGF、PDGF-BB、IGF-I。該發明所述無血清培養基化學成分明確、無動物源、無血清，培養細胞安全、理想，避免了摻雜動物成分和批次的不穩定性，培養間充質干細胞結果顯示其細胞總數、細胞表型和分泌細胞因子均正常。然而，一方面，上述培養基成分較多，氨基酸包含L-精氨酸、L-胱氨酸、L-組氨酸、L-異亮氨酸、L-亮氨酸、L-賴氨酸、L-甲硫氨酸、L-苯丙氨酸、L-蘇氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-纈氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-天冬酰胺、L-谷氨酸、甘氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸；維生素包含泛酸鈣、氯化膽堿、葉酸、內消旋肌醇、煙酰胺、鹽酸吡哆醛、核黃素、鹽酸硫胺；脂質包含花生四烯酸、膽固醇、DL-α-生育酚乙酸酯、亞油酸、亞麻酸、肉豆蔻酸、油酸、棕櫚油酸、棕櫚酸、硬脂酸；微量元素包含Cu、Zn、Se、Fe、Sn、Ni、Ag、Al、Cr、Ge、Zr、Rb、Co、Cd、Ba、K，成分過于復雜，造成制備上的不便；另一方面，培養基要能夠保證細胞傳代的穩定性，以滿足科研的需要，關于上述培養基傳代的穩定性尚不清楚。?

綜上所述，亟需一種成分簡明、傳代穩定性好的間質干細胞無血清培養基。?

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種高效的體外培養人臍帶間質干細胞的無血清培養體系。?

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：?

一種高效的體外培養人臍帶間質干細胞的無血清培養體系，所述的無血清培養體系包含以下質量比的各成分：

優選地，所述的無血清培養體系包含以下質量比的各成分：?

更優選地，所述的無血清培養體系包含以下質量比的各成分：?

優選地，所述的基礎培養基a-MEM為OriCell^TM?MEM極限必需培養基。?

優選地，所述的非必需氨基酸的成分為：?

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更優選地，所述的非必需氨基酸的成分為：?

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