[發明專利]紅竹體細胞胚胎發生的方法

無效

• 申請號: 201410394490.8
• 申請日: 2014-08-07
• 公開（公告）號: CN104303996A
• 公開（公告）日: 2015-01-28
• 發明（設計）人: 岳晉軍;顧小平;袁金玲;吳曉麗
• 申請（專利權）人: 中國林業科學研究院亞熱帶林業研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.紅竹Phyllostachys?iridescens體細胞胚胎發生的方法，其特征在于，包括：外植體消毒，胚性愈傷組織誘導與增殖，胚狀體誘導與萌發，以及壯苗、煉苗和移栽的過程，具體步驟如下：

(1)外植體消毒：選擇健康飽滿的種實，先用75％體積比的乙醇浸泡消毒1min；再用每升加5-6滴吐溫-80的0.2％次氯酸鈉浸泡消毒15-20min，期間振蕩3-4次；然后用無菌水沖洗5-6次；最后用無菌紙吸干表面水分，接種備用；

(2)胚性愈傷組織誘導與增殖：將消毒后的外植體接種到誘導培養基上，暗培養30-50d使愈傷組織形成，愈傷組織誘導培養基是以MS培養基為基礎，添加1.0-6.0mg/L的2，4-D、0.01-1.0mg/L的picloram、0.1-5.0mg/L的ZT、8.0g/L的卡拉膠、300mg/L的脯氨酸、300mg/L的谷氨酰胺、200mg/L的水解酪蛋白；然后將淡黃色致密的胚性愈傷組織分離出來，接種到增殖培養基上，暗培養60-90d使胚性愈傷組織增殖，每30d轉接一次，增殖培養基是以MS培養基為基礎，添加1.0-6.0mg/L的2，4-D、0.01-1.0mg/L的picloram、8.0g/L的卡拉膠、300mg/L的脯氨酸、300mg/L的谷氨酰胺、200mg/L的水解酪蛋白；

(3)胚狀體誘導與萌發：將增殖后的胚性愈傷組織接種到胚狀體誘導培養基上，暗培養10-20d，使胚狀體形成，胚狀體誘導培養基是以MS培養基為基礎，添加1.0-8.0mg/L的ZT、0.1-5.0mg/L的NAA、0.1-5.0mg/L的GA、30g/L的蔗糖、8g/L的卡拉膠；然后將胚狀體接種到萌發培養基上，光照培養20-30d，胚狀體逐漸萌發形成再生植株，萌發培養是以MS培養基為基礎，添加0.1-5.0mg/L的NAA、0.1-5.0mg/L的GA、300mg/L的脯氨酸、300mg/L的谷氨酰胺、200mg/L的水解酪蛋白、8g/L的卡拉膠；光照時間12h/d，光照強度1000-2000lux

(4)壯苗、煉苗和移栽：將體細胞胚胎再生的小植株接種到壯苗培養基上培養20-30d，開瓶煉苗5-7d，取出小苗清洗根部的培養基，再用0.1％的高錳酸鉀溶液清洗根部，然后將小苗栽植到滅菌的介質中，遮陰散射光培養一個月后，幼苗成活；壯苗培養基是以MS培養基為基礎，添加1.0-4.0mg/L的NAA、0.2-0.5mg/L的TDZ、8g/L的卡拉膠。