[發明專利]一種中華鱉微衛星分子標記及應用

無效

• 申請號: 201410394467.9
• 申請日: 2014-08-12
• 公開（公告）號: CN104131010A
• 公開（公告）日: 2014-11-05
• 發明（設計）人: 王曉清;馬曉;熊鋼;曾丹;嚴璐琪
• 申請（專利權）人: 湖南農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 何為;袁穎華

技術領域

本發明屬于水產動物遺傳育種技術領域，具體涉及一種中華鱉微衛星DNA分子標記位點及其應用。

背景技術

中華鱉(Pelodiscus?sinensis)，又稱甲魚、團魚、水魚，隸屬爬行龜鱉目(Testudinata)，鱉科(Tironychidae)，中華鱉屬(Pelodiscus)，是我國淡水特種水產養殖產品之一，廣泛分布于我國除西藏、青海和新疆外的其他地區，國外主要在朝鮮、日本和越南有分布(黃雪貞等，2012)。20世紀90年代至今，中華鱉養殖業發展過程中存在養殖場相互引種及外來鱉種涌入的問題，致使當前中華鱉種質混雜。為保障中華鱉養殖業的健康發展，在湖南長沙、安徽蚌埠、山東廣饒、江西鄱陽湖等地相繼建立了中華鱉原種場、良種場。

微衛星(SSR)標記，其特點是含1～6個堿基的核心單元串聯重復的核心序列，核心序列側翼序列是相對保守的單拷貝。SSR的優點包括：數量豐富，分布均勻；各SSR位點有特異性引物，擴增結果重復性好。微衛星在不同物種間的含量和分布不同，存在差異(Toth?et?al.，2000)，并且主要分布在非編碼區。其序列長度與核心序列重復次數相關，變異與核心序列的重復次數呈正比。微衛星兩端的序列多為保守的單拷貝序列，可據此設計特異性引物，通過PCR技術擴增獲得相應序列，經PAGE分析，獲得不同基因型個體的多態性。選用微衛星標記對中華鱉種質資源進行保護和合理開發、分子標記輔助育種等具有重要意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種中華鱉微衛星分子標記及應用，從中華鱉EST序列中篩選出17個具多態性的中華鱉的微衛星位點，以及相應的引物，為中華鱉的種群遺傳學多樣性分析及分子標記輔助育種技術提供有效的工具。

為達上述目的，本發明采用的技術方案是：一種中華鱉微衛星分子標記，所述分子標記選自如SEQ?ID?NO：1至SEQ?ID?NO：17所示的核苷酸序列。

本發明還提供上述17個微衛星分子標記位點上設計的引物對以用于PCR擴增，其中：

序列為SEQ?ID?NO:1的微衛星位點設計的引物對PS-1，其序列為：

PS-1?F：5’-TTCCCAGGCTTTAACCAAGAGG-3’，SEQ?ID?NO：18；

PS-1?R：5’-GCAACAATATGACAGCGACACT-3’，SEQ?ID?NO：19；

序列為SEQ?ID?NO：2的微衛星位點設計的引物對PS-2，其序列為：

PS-2?F：5’-CCTCTCAGGTTTGTAATTTGCCATT-3’，SEQ?ID?NO：20；

PS-2?R：5’-AACACATTGCCATCTCCTCAGT-3’，SEQ?ID?NO：21；

序列為SEQ?ID?NO：3的微衛星位點設計的引物對PS-3，其序列為：

PS-3?F：5’-AGCATGTGGTACTGATGTGTAG-3’，SEQ?ID?NO：22；

PS-3?R：5’-ACTGTCATACATTCGCTAGTGA-3’，SEQ?ID?NO：23；

序列為SEQ?ID?NO：4的微衛星位點設計的引物對PS-4，其序列為：

PS-4?F：5’-GCTCTACACCTTCCACCTTGTT-3’，SEQ?ID?NO：24；

PS-4?R：5’-GGGTGAAGACTCTGATGGGTAG-3’，SEQ?ID?NO：25；

序列為SEQ?ID?NO：5的微衛星位點設計的引物對PS-5，其序列為：

PS-5?F：5’-TGTATCATTCCTGTGCTGTA-3’，SEQ?ID?NO：26；

PS-5?R：5’-GCAATTCTGTCGTGTGAG-3’，SEQ?ID?NO：27；

序列為SEQ?ID?NO：6的微衛星位點設計的引物對PS-6，其序列為：

PS-6?F：5’-TCCGCCATGATCGAGAAGAAT-3’，SEQ?ID?NO：28；

PS-6?R：5’-CCTGTCCATCAATCACACTGAG-3’，SEQ?ID?NO：29；