[發(fā)明專利]一株黑曲霉及其培養(yǎng)方法與應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410389976.2
• 申請日: 2014-08-08
• 公開（公告）號: CN104130950B
• 公開（公告）日: 2017-01-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 干昭波;邵先豹;楊騰騰;竇光朋;賈玉秋
• 申請（專利權(quán)）人: 山東百龍創(chuàng)園生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12N9/10;C12P19/18;C12R1/685
• 代理公司: 濟南金迪知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司37219
• 代理人: 朱家富

1.一株黑曲霉(Aspergillus?niger)BLCY-02，2014年07月15日保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號CGMCC?No.9449，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所。

2.權(quán)利要求1所述黑曲霉(Aspergillus?niger)BLCY-02的培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟如下：

(1)取黑曲霉(Aspergillus?niger)BLCY-02接種于固體培養(yǎng)基中，在30～38℃的條件下，活化培養(yǎng)20～30h，制得活化菌株；

(2)取步驟(1)制得的活化菌株，接種于種子培養(yǎng)基中，在30～38℃的條件下，增殖培養(yǎng)20～30h，制得種子液；

(3)取步驟(2)制得的種子液，按體積比1～10％的比例接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，在30～38℃，擴大培養(yǎng)20～35h，即得菌體發(fā)酵液。

3.如權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟(2)中的種子培養(yǎng)基組分如下，均為重量百分比：

硝酸鈉0.3％；磷酸氫二鉀0.1％；硫酸鎂(MgSO₄·7H₂O)0.05％；酵母膏1％；蔗糖5％，余量水，pH為4.0～6.0。

4.如權(quán)利要求2所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟(3)中的發(fā)酵培養(yǎng)基組分如下，均為重量百分比：

蔗糖10％，酵母膏1％，硝酸鈉0.3％，硫酸鎂(MgSO₄·7H₂O)0.05％，余量水。

5.權(quán)利要求1所述黑曲霉(Aspergillus?niger)BLCY-02在制備β-果糖基轉(zhuǎn)移酶中的應(yīng)用。

6.如權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟如下：

(a)取上述制備的菌體發(fā)酵液經(jīng)固液分離，洗滌菌體，合并分離液及洗滌液，制得粗酶液；

(b)將步驟(a)制得的粗酶液置于40～50℃水浴中熱變性50～70min，固液分離，取上清液，加入固體硫酸銨，使溶液達到40％的硫酸銨飽和度，冷藏靜止2h，固液分離，取上清液，再加入固體硫酸銨，使溶液達到90％的硫酸銨飽和度，冷藏靜止2h，固液分離，取沉淀，溶解于pH?7.8、0.05mol/L的磷酸鹽緩沖中，經(jīng)DEAE-纖維素陰離子交換柱層析，收集洗脫液，經(jīng)超低溫真空濃縮，制得β-果糖基轉(zhuǎn)移酶。

7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述步驟(a)的洗滌菌體為采用pH?7.0、濃度50mmol/L的磷酸緩沖液重懸，然后經(jīng)固液分離，取液體，制得洗滌液。

8.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述步驟(a)、(b)中的固液分離均為在4℃、10000r/min條件下，離心60min。

9.權(quán)利要求5制備的β-果糖基轉(zhuǎn)移酶在制備低聚果糖中的應(yīng)用。