[發明專利]卵子與胚胎處理液及其制備方法

在審

• 申請號: 201410388958.2
• 申請日: 2014-08-08
• 公開（公告）號: CN104140948A
• 公開（公告）日: 2014-11-12
• 發明（設計）人: 王維華;呂汝舉;劉美靜;莊巍;王英超
• 申請（專利權）人: 山東威高新生醫療器械有限公司
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;C12N5/075
• 代理公司: 青島高曉專利事務所 37104
• 代理人: 宋文學

技術領域

本發明涉及人工輔助生殖技術，尤其涉及一種卵子與胚胎處理液及其制備方法。

背景技術

卵子與胚胎處理液對囊胚的發育培養已廣泛應用于試管嬰兒技術中。卵子與胚胎處理液的目的是：一是提供卵子存活的營養物質；二是為胚胎的生存提供必要的環境。卵子與胚胎處理液的用途：用來在培養箱外處理和操作卵子和胚胎的液體。

目前，我國輔助生殖技術中的卵子與胚胎處理液依賴進口成品，成本高且溶液的有效性的好壞不能很好的表現，如果在培養液變質后仍繼續使用將對實驗或臨床操作造成不可逆轉的結果。

發明內容

本發明的目的在于提供一種各項指標達到體外培養液的標準使用安全，易于判斷培養液是否變質的卵子與胚胎處理液，為輔助生殖技術提供有力保證。

本發明的卵子與胚胎處理液，包含對受精卵進行處理培養的組合物、殺菌劑。

所述殺菌劑為慶大霉素，濃度9.5-10.5mg/L。

所述組合物中包含氯化鈉92.815-102.585mmol/L,氯化鉀4.465-4.935mmol/L，硫酸鎂0.19-0.21mmol/L，氯化鈣1.9-2.1?mmol/L，碳酸氫鈉3.8-4.2mmol/L，4-羥乙基哌嗪乙磺酸HEPES?19.95-22.05mmol/L，葡萄糖2.66-2.94mmol/L，丙酮酸鈉0.314-0.347mmol/L，乳酸鈉2.274-2.514g/L，丙氨酰谷氨酰胺0.95-1.05mmol/L，?；撬?.095-0.105mmol/L，磷酸二氫鉀0.352-0.389mmol/L，慶大霉素9.5-10.5?mg/L。

卵子與胚胎處理液的溶劑采用超純水。

所述處理液中還可以選擇性加入指示劑酚紅，濃度9.5-10.5mg/L。

本發明的卵子與胚胎處理液的pH=7.20-7.40，滲透壓260-290mOsm/Kg。

本發明卵子與胚胎處理液的制備方法，包括下面步驟：

（1）卵子與胚胎處理液原液的配制

a、先按照比例稱量各組分，并分開放置；

b、先將稱量好的組分（除殺菌劑、選擇性添加指示劑和碳酸氫鈉）溶于超純水中，溶解過程中遵循先固體后液體，NaHCO₃最后加入的原則；

c、向步驟b所得溶液中加入稱量好的殺菌劑、選擇性添加指示劑和NaHCO₃；

d、檢測溶液滲透壓和pH值，如果pH值不在范圍內則用配制好的鹽酸和氫氧化鈉溶液調節pH值，并記錄最終滲透壓和pH值；

（2）卵子與胚胎處理液原液的處理

a、將卵子與胚胎處理液的原液在超凈工作臺下利用0.2μm的濾膜過濾除菌；

b、在無菌環境下對過濾后的卵子與胚胎處理液原液進行分裝封口，得到卵子與胚胎處理液，將其放置冰箱或冷庫內保存。

（3）卵子與胚胎處理液的檢測

對卵子與胚胎處理液進行檢測，檢測項目是pH值、滲透壓、細胞毒性、皮內刺激、致敏、無菌、熱原、細菌內毒素、體外鼠胚試驗來判斷卵子與胚胎處理液是否合格。

本發明的有益效果是，?1、本發明卵子與胚胎處理液的原料均是已經證明其安全性的物質，在制備過程中其溶劑采用超純水，超純水的總有機碳（TOC）超低，避免了因雜質過多影響測定的結果。2使用抗生素來抑制細菌的生長，如慶大霉素是一種廣譜、熱穩定性好的抗生素，在卵子與胚胎處理液中添加慶大霉素可以有效抑制細菌的生長。3、、國內還沒有成型的用于試管嬰兒技術的培養液，此配方和制備方法為國內的試管嬰兒技術提供了有力的保證，避免了國外產品因長途運輸帶來的不明因素，同時配制工藝操作簡單合理，檢測嚴密，能夠提供新鮮的培養液供生殖中心或科研院所使用。4、卵子與胚胎處理液中選擇性添加指示劑酚紅，酚紅在pH變化時顏色變化明顯，pH在7.20-7.40范圍內酚紅溶液為粉紅色到橙紅色，當pH值小于6.8時為黃色，當pH值大于8.4時為紅色，變色比較明顯,卵子與胚胎處理液的pH?7.20-7.40在此范圍內溶液為粉紅色到橙紅色，當卵子與胚胎處理液顏色與此不符時，說明該卵子與胚胎處理液變質，不能用于實驗或臨床，從而避免了使用變質卵子與胚胎處理液而產生的風險。卵子與胚胎處理液中如不含酚紅，則溶液呈透明、清澈，在有效期內能保證無菌且正常使用，如變渾濁則不能使用。

具體實施方式

以下通過實施例對本發明做進一步的說明。

一、卵子與胚胎處理液配方及制備方法

表1卵子與胚胎處理液的配方