[發(fā)明專利]一種四倍體矮牽牛的誘變方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410387594.6
• 申請日: 2014-08-07
• 公開（公告）號: CN104160953A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發(fā)明（設計）人: 魏躍;嵇怡;樊開青;劉艷;張瑩;史紅林;陳嘯寅;顏志明;王全智;賈思振;董慧
• 申請（專利權）人: 江蘇農(nóng)林職業(yè)技術學院
• 主分類號: A01H1/08
• 分類號: A01H1/08
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王云

1.一種四倍體矮牽牛的誘變方法其特征在于，該方法包括如下步驟：?

（1）將矮牽牛種子播種在穴盤中，當幼苗2片子葉完全展開時，用吸附液體效果較好的介質(zhì)放在2片子葉中間，與生長點緊密接觸；

（2）將穴盤放置于光照培養(yǎng)箱中，每天早8點和下午3點進行變溫處理，處理方法為：用質(zhì)量濃度為1%的二甲基亞砜配制的二甲戊樂靈6-60mg/L和質(zhì)量濃度為0.1%-1%的秋水仙素混合后得到的藥液滴到附著在2片子葉之間的介質(zhì)上，對子葉展開期的二倍體矮牽牛幼苗進行誘導處理，每天處理2次持續(xù)處理3天；

（3）將處理結束的幼苗繼續(xù)在光照培養(yǎng)箱中生長5天后，移入溫室大棚中；

（4）當誘變植株生長發(fā)育進入成株后，初步進行農(nóng)藝性狀、解剖學鑒定，在此基礎上進行細胞學鑒定，選擇染色體數(shù)目2n=28的植株確定為四倍體植株。

2.根據(jù)權利要求1所述的四倍體矮牽牛的誘變方法，其特征在于，步驟（2）中，光照培養(yǎng)箱中，光照強度設定為?4000lx。

3.根據(jù)權利要求1所述的四倍體矮牽牛的誘變方法，其特征在于，步驟（2）中，所述變溫處理的方法為：每次處理前3小時光照培養(yǎng)箱溫度設定為15℃，處理后溫度設定為30℃。

4.根據(jù)權利要求1所述的四倍體矮牽牛的誘變方法，其特征在于，步驟（2）中，所述藥液的配制方法為：先配制質(zhì)量濃度為1%二甲基亞砜溶液，再根據(jù)計算結果往里面添加二甲戊樂靈和秋水仙素，其中二甲戊樂靈是質(zhì)量濃度為33%的乳油。

5.根據(jù)權利要求1所述的四倍體矮牽牛的誘變方法，其特征在于，步驟（4）中觀測的農(nóng)藝性狀有：葉片長度與寬度、葉片厚度、莖粗、株高、萼片長度與寬度、柱頭和花藥大小。

6.根據(jù)權利要求1所述的四倍體矮牽牛的誘變方法，其特征在于，步驟（4）中解剖學觀察性狀有葉背氣孔和花粉細胞的大小，觀察氣孔方法為：用尖頭鑷子將葉片背面表皮撕下，放置于載玻片上，滴一滴清水在40倍顯微鏡下用具有顯微測微標尺的目鏡測量氣孔長與寬；觀察花粉細胞方法為：從開放花朵中取少量成熟花粉，放置于載玻片上，滴一滴質(zhì)量濃度為1%醋酸洋紅染色，5分鐘后在40倍顯微鏡下用具有顯微測微標尺的目鏡測量花粉細胞大小。

7.根據(jù)權利要求1所述的四倍體矮牽牛的誘變方法，其特征在于，步驟（4）中細胞學鑒定方法為：于晴天早晨8:00-10:00取長度4~7mm的幼蕾，先置于0.002mol.L^-1?8-羥基喹啉水溶液中預處理3小時，蒸餾水沖洗3次后轉入卡諾氏固定液固定24小時，蒸餾水沖洗3次在1?mol.L^-1HCl溶液60℃水浴解離5分鐘，蒸餾水沖洗3次用濾紙吸干水，放入45%（體積百分濃度）醋酸溶液配制的1%（質(zhì)量濃度）洋紅染色液染色10小時；用鑷子將幼蕾移入干凈的載玻片上，用刀片切取雌蕊柱頭部位，滴1-2滴1%洋紅染色液，蓋上蓋玻片，用濾紙吸去多余洋紅染色液；蓋玻片上覆蓋4-5層濾紙，用鉛筆一端垂直敲打10余下，使材料盡量分散壓平，最后用大拇指垂直按壓，制片在酒精燈烘烤1-2秒；先在低倍鏡下尋找有絲分裂中期分裂相視野，然后在10×100倍油鏡下進行染色體計數(shù)。

8.根據(jù)權利要求7所述的四倍體矮牽牛的誘變方法，其特征在于，所述卡諾氏固定液是由無水乙醇和冰醋酸按體積比3:1制成的。

9.根據(jù)權利要求7所述的四倍體矮牽牛的誘變方法，其特征在于，所述體積百分濃度45%醋酸溶液配制的1%（質(zhì)量濃度）洋紅染色液配制方法為：先加入45ml乙酸再加水55ml，混勻后將洋紅粉末1克緩慢倒入100ml?45%醋酸溶液中，邊煮邊攪拌，煮沸冷卻后過濾即可使用。