[發(fā)明專(zhuān)利]一種PRRT2蛋白相關(guān)的抗原表位肽及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410387385.1
• 申請(qǐng)日: 2014-08-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105330735B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-10-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金穎;李春
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C07K14/705
• 分類(lèi)號(hào): C07K14/705;C07K19/00;C07K16/28;C12N15/12;C12N15/13;A61K38/17;A61K39/395;A61K48/00;A61P25/14;A61P25/08;G01N33/68
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 馬莉華;崔佳佳

本發(fā)明提供了一種PRRT2蛋白相關(guān)的抗原表位肽及其應(yīng)用，具體的本發(fā)明提供了一種抗原表位肽，所述抗原表位肽源自PRRT2蛋白，并且所述抗原表位肽的氨基酸長(zhǎng)度為100?200個(gè)氨基酸。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，使用該抗原表位肽免疫動(dòng)物，能夠制備出對(duì)PRRT2特異性強(qiáng)、靈敏度度高的抗PRRT2抗體。而且該抗體對(duì)檢測(cè)方法的適用性廣，可用于western blot分析、細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)、組織免疫熒光檢測(cè)和免疫共沉淀(IP)分析等。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及一種PRRT2蛋白相關(guān)的抗原表位肽及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

PRRT2(proline-rich transmembrane protein)為富含脯氨酸的跨膜蛋白，在人類(lèi)已發(fā)現(xiàn)了3個(gè)PRRT2蛋白亞型(isoform 1、isoform 2和isoform 3)，其編碼基因定位于16號(hào)染色體上(16p11.2)。最近的研究表明，PRRT2基因突變與運(yùn)動(dòng)誘發(fā)性運(yùn)動(dòng)障礙(PKD)、良性家族性嬰兒癲癇癥(BFIE)和嬰兒驚厥伴發(fā)作性手足舞蹈徐動(dòng)征(ICCA)等多種運(yùn)動(dòng)障礙疾病的發(fā)病相關(guān)，提示PRRT2突變是多種運(yùn)動(dòng)障礙疾病共同的致病因素之一。

目前，已經(jīng)出現(xiàn)了商業(yè)化的PRRT2抗體，但這些商品化的抗體基本都只適用于單一的檢測(cè)方法，如PRRT2的western blot檢測(cè)，而且其識(shí)別抗原的特異性不強(qiáng)。此外，PRRT2基因的突變會(huì)導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)障礙等相關(guān)的疾病。現(xiàn)有的商品化PRRT2抗體大多只能檢測(cè)正常的PRRT2蛋白，不能檢測(cè)突變的PRRT2蛋白，因此，這類(lèi)抗體無(wú)法用于疾病發(fā)病機(jī)理研究。

由于沒(méi)有高質(zhì)量的同時(shí)可以檢測(cè)正常和突變PRRT2的抗體，人們無(wú)法在蛋白水平上系統(tǒng)研究PRRT2在組織中的分布、表達(dá)規(guī)律、亞細(xì)胞定位及其與其他蛋白的相互作用，因而無(wú)法揭示PRRT2基因突變導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)障礙的致病機(jī)理。因此，制備靈敏度高、特異性強(qiáng)、同時(shí)可檢測(cè)正常和突變PRRT2的PRRT2抗體是此類(lèi)運(yùn)動(dòng)障礙疾病發(fā)病機(jī)理研究工作中亟待解決的關(guān)鍵技術(shù)問(wèn)題之一。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種制備PRRT2抗體的技術(shù)，通過(guò)該技術(shù)制備的PRRT2抗體適用于組織、細(xì)胞中PRRT2的檢測(cè)，特別適合針對(duì)由PRRT2基因突變導(dǎo)致的人神經(jīng)系統(tǒng)疾病的致病機(jī)理的研究。

本發(fā)明的第一方面，提供了一種抗原表位肽，所述抗原表位肽源自PRRT2蛋白，并且所述抗原表位肽的氨基酸長(zhǎng)度為100-200個(gè)氨基酸。

在另一優(yōu)選例中，所述的抗原表位肽的氨基酸序列選自下組：

(A)具有SEQ ID NO:4或6所示氨基酸序列的多肽；

(B)具有與SEQ ID NO:4或6中任一所示氨基酸序列≥80％同源性(優(yōu)選地，≥90％的同源性；等優(yōu)選地≥95％的同源性；最優(yōu)選地，≥97％的同源性)的多肽，且所述多肽具有與抗PRRT2蛋白抗體的結(jié)合能力；

(C)將SEQ ID NO:4或6中任一所示氨基酸序列經(jīng)過(guò)1-5個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失或添加而形成的，且保留與抗PRRT2蛋白抗體的結(jié)合能力的衍生多肽。

在另一優(yōu)選例中，所述PRRT2蛋白為哺乳動(dòng)物的PRRT2蛋白(包括人)。

本發(fā)明的第二方面，提供了一種融合蛋白，所述融合蛋白含有本發(fā)明第一方面所述的抗原肽和任選的標(biāo)簽序列。

在另一優(yōu)選例中，所述標(biāo)簽序列選自：GST標(biāo)簽序列、FLAG標(biāo)簽序列、HIS標(biāo)簽序列、MYC標(biāo)簽序列。

本發(fā)明的第三方面，提供了一種抗體，所述抗體特異性的結(jié)合本發(fā)明第一方面所述的抗原表位肽或本發(fā)明第二方面所述的融合蛋白，并且所述抗體能夠特異性地結(jié)合天然的PRRT2蛋白和突變的PRRT2蛋白。

在另一優(yōu)選例中，所述天然的PRRT2蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.:1所示。