[發(fā)明專(zhuān)利]一種煙草小苗期快速鑒定黑脛病抗性的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410386031.5
• 申請(qǐng)日: 2014-08-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104152533A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-11-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王仁剛;林世鋒;王軼;曾吉凡
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 貴州省煙草科學(xué)研究院
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/18
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/18;C12N1/14;A01G7/00
• 代理公司: 無(wú)
• 代理人: 無(wú)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物抗病性鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及煙草黑脛病抗性鑒定方法。

背景技術(shù)

煙草黑脛病是煙草生產(chǎn)上最具毀滅性的病害之一，同時(shí)也是世界煙草生產(chǎn)中危害最嚴(yán)重的病害之一，該病在我國(guó)各產(chǎn)煙省均有不同程度的發(fā)生，且危害較為普遍和嚴(yán)重。選用煙草抗黑脛病品種是解決這一病害的重要途徑。

目前，現(xiàn)有的煙草品種抗病性鑒定方法主要有田間黑脛病圃鑒定法和苗期鑒定方法。田間黑脛病圃鑒定法由于受地力、季節(jié)，每年的鑒定品種數(shù)量受到很大限制，且年份間鑒定的品種抗性有一定的差異；而現(xiàn)有的苗期鑒定方法都要育苗后移栽到花盆、室內(nèi)病圃中或移植到新的盤(pán)上，缺點(diǎn)是移栽緩苗后接種，時(shí)間長(zhǎng)，工作量大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種小苗不移栽/移植的鑒定方法，不人為創(chuàng)造傷口，更加快捷方便，經(jīng)過(guò)多年的田間病圃鑒定與本發(fā)明方法的同步對(duì)比驗(yàn)證，本發(fā)明鑒定結(jié)果與田間鑒定相當(dāng)，且年度間差異小，鑒定時(shí)間短，工作量少。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案：小苗快速鑒定法在溫室中進(jìn)行，溫度環(huán)境25℃。將待鑒定的各煙草品種播種到54孔育苗穴盤(pán)中育苗，每個(gè)品種/系1盤(pán)，育苗管理措施同常規(guī)煙葉生產(chǎn)。當(dāng)苗齡達(dá)35～45天后（不需剪葉），進(jìn)行人工接種。對(duì)所有供試煙株在穴盤(pán)的穴孔中埋入預(yù)先培養(yǎng)的黑脛病接種材料0.1～1g。分別在接種后3～10天調(diào)查病情分級(jí)，計(jì)算病情指數(shù)。

接種材料的制作：將小米用水煮至6分熟，撈出放到紗布上攤開(kāi)，瀝水10分鐘。裝入250ml圓形塑料組培瓶中，裝至瓶體的2/3處。用高壓蒸氣滅菌鍋121℃滅菌1小時(shí)。冷卻至室溫后，將分離好的在燕麥培養(yǎng)基上的黑脛病菌絲接種到小米上，在培養(yǎng)箱中28℃下培養(yǎng)15天，菌絲長(zhǎng)滿即可。?

記載方法執(zhí)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)“煙草病蟲(chóng)害分級(jí)及調(diào)查方法（GB/T?23222-2008）”。病情指數(shù)（D）計(jì)算公式：

D=∑（各級(jí)病株數(shù)×該病級(jí)數(shù)）×100/（調(diào)查總株數(shù)×最高級(jí)數(shù)）

病害嚴(yán)重度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T?23224-2008執(zhí)行，?抗性劃分為6個(gè)級(jí)別：高抗或免疫（I）：病指為0；抗?。≧）：抗?。≧）；中抗（MR）：病指為20.1～40；中感（MS）：病指為40.1～60；感（S）：病指為60.1～80；高感（HS）：病指為80.1～100。

本發(fā)明達(dá)到的有益效果：

本發(fā)明采用小苗不移栽/移植的鑒定方法，不人為創(chuàng)造傷口，更加快捷方便。經(jīng)過(guò)多年的常規(guī)田間病圃鑒定與本發(fā)明方法的同步驗(yàn)證，本發(fā)明鑒定結(jié)果與田間鑒定相當(dāng)，且年度間差異小。具體表現(xiàn)如下：

（1）鑒定周期更短，35～45天小苗不剪葉即可用于鑒定，整個(gè)鑒定周期僅為45～55天即可，比現(xiàn)有的其它鑒定方法的鑒定周期更短，說(shuō)明本發(fā)明的方法更高效；

（2）育種方法不同，其它方法均采用漂浮育苗，移栽后鑒定或移植到新盤(pán)上再做鑒定。本方法采用大孔穴盤(pán)，有足夠空間在原盤(pán)上直接鑒定，盤(pán)不在營(yíng)養(yǎng)液中浸泡，更適合固體接種病原接種；

（3）病原接種材料的制作不同。常規(guī)的菌谷制作是采用帶殼的谷子制作，本方法的采用脫粒后的小米制作，更方便接種，并有利于發(fā)病。

（4）黑脛病接種材料所用的小米經(jīng)過(guò)水煮、瀝干、消毒、填裝在矩形槽體并進(jìn)行均勻分塊，這樣在使用時(shí)直接按塊拿取，這樣可以進(jìn)一步提高試驗(yàn)速率、提高試驗(yàn)規(guī)范化程度。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

1、材料與方法

1.1、試驗(yàn)材料

貴州省煙草品種/系10份烤煙材料，對(duì)照品種革新3號(hào)、金星6007、小黃金1025。

1.2、試驗(yàn)方法

1.2.1、常規(guī)病圃鑒定法

田間病圃鑒定在貴州省煙草科學(xué)研究院烤煙品種試驗(yàn)黑脛病鑒定圃中進(jìn)行。試驗(yàn)設(shè)4個(gè)重復(fù)，每重復(fù)1行，栽煙10株。采用漂浮育苗法，育苗方法同常規(guī)生產(chǎn)。剪葉兩次，培育成壯苗后，于5月上旬移栽，密度1×0.6m²，畝施純氮6公斤。其它栽培管理措施同大田生產(chǎn)。設(shè)革新3號(hào)為抗病對(duì)照、金星6007為中抗對(duì)照，小黃金1025為感病對(duì)照。田間鑒定于移栽后20天，對(duì)所有供試煙株進(jìn)行人工接種，在煙株根部埋入預(yù)先培養(yǎng)的黑脛病接種材料3g。分別在接種后20天、40天、60天調(diào)查病情分級(jí)，取三次調(diào)查平均值計(jì)算病情指數(shù)。

1.2.2、本發(fā)明方法