[發(fā)明專利]一種防治楊樹灰斑病菌的鏈霉菌發(fā)酵液的制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410384330.5
• 申請(qǐng)日: 2014-08-06
• 公開（公告）號(hào): CN104140982A
• 公開（公告）日: 2014-11-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉雪峰;劉雪英;馬玲;張靜;石鳳梅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東北林業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P1/06
• 分類號(hào): C12P1/06;A01N63/02;A01P3/00;C12R1/465
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所 23109
• 代理人: 牟永林

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種發(fā)酵液的制備方法。

背景技術(shù)

楊樹灰斑病是由楊樹灰斑病菌(Sporocadus?populinus(Bres.)Orsenigo,Rodondi&B.Sutton＝Coryneum?populinum?Bres.)引起的一種危害楊樹葉片葉部病害之一，發(fā)生面積大，危害嚴(yán)重，主要發(fā)生在幼樹、幼苗的葉片和樹梢上，使葉片提早脫落，干部潰瘍，嫩梢枯頂，生長(zhǎng)量減低，嚴(yán)重時(shí)可造成植株死亡，移栽成活率降低，對(duì)楊樹育苗和造林威脅很大。

植物病害是威脅農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的重要因素之一，目前使用化學(xué)農(nóng)藥是控制植物病害的主要方法，但化學(xué)農(nóng)藥的長(zhǎng)期使用不僅污染環(huán)境，破壞生態(tài)平衡，而且殘留對(duì)人、畜都有危害，并且使病原菌產(chǎn)生了抗藥性，因此植物病害的生物防治研究越來(lái)越受到重視。植物內(nèi)生放線菌是生活在植物健康組織內(nèi)部的微生物，與植物宿主及和它共生的其他微生物間有密切的關(guān)系，是生物防治的一個(gè)新菌種。近年來(lái)植物內(nèi)生菌已引起了植物保護(hù)學(xué)家、微生物學(xué)家、生態(tài)學(xué)家等的廣泛關(guān)注，逐步成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)，國(guó)內(nèi)外研究均表明內(nèi)生菌對(duì)防治植物病害具有潛在的應(yīng)用和開發(fā)價(jià)值，因此尋找防治楊樹灰斑病菌拮抗菌是重要的防治途徑之一。本發(fā)明對(duì)該菌株發(fā)酵代謝產(chǎn)物進(jìn)行了抑制植物病原真菌作用的研究。該發(fā)明為微生物源農(nóng)藥的進(jìn)一步研制和開發(fā)提供優(yōu)良的出發(fā)菌株。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明是要解決化學(xué)農(nóng)藥不安全，微生物源農(nóng)藥種類較少的技術(shù)問(wèn)題，從而提供了一種防治楊樹灰斑病菌的鏈霉菌發(fā)酵液的制備方法。

本發(fā)明的一種防治楊樹灰斑病菌的鏈霉菌發(fā)酵液的制備方法是按以下步驟進(jìn)行的：

一、菌種的活化培養(yǎng)：將鏈霉菌(Streptomyces?sp.)Syjd3接種高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基上，在溫度為27～29℃條件下培養(yǎng)4～6d，得到活化的鏈霉菌(Streptomyces?sp.)Syjd3；

二、發(fā)酵液培養(yǎng)：向500mL三角瓶中裝入300mL的高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基，然后在110～121℃溫度下高壓滅菌20～30min，冷卻后，在無(wú)菌條件下挑取2～3接種環(huán)的步驟一活化的鏈霉菌(Streptomyces?sp.)Syjd3接種到高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基中，然后放入搖床培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，搖床溫度為27～29℃，搖床轉(zhuǎn)數(shù)為180～230轉(zhuǎn)/分鐘，發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間為7～15d，即得到防治楊樹灰斑病菌的鏈霉菌發(fā)酵液；

其中，所述高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基由20g可溶性淀粉、1g?KNO₃、0.5g?NaCl、0.5g?K₂HPO₄、0.5g?MgSO₄、0.01g?FeSO₄、20g瓊脂和1000mL水組成，pH為7.2～7.6，121℃滅菌20分鐘；

所述高氏一號(hào)液體培養(yǎng)基由20g可溶性淀粉、1g?KNO₃、0.5g?NaCl、0.5g?K₂HPO₄、0.5gMgSO₄、0.01g?FeSO₄和1000mL水組成，pH為7.2～7.6，121℃滅菌20分鐘；

所述鏈霉菌(Streptomyces?sp.)Syjd3，保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏地址是北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)，保藏日期為2014年6月17日，保藏編號(hào)為CGMCC?No.9355。

本發(fā)明包括以下有益效果：

1、本發(fā)明提供了鏈霉菌Syjd3發(fā)酵獲得活性代謝產(chǎn)物的方法；該代謝產(chǎn)物可應(yīng)用于植物真菌病害的防治，解決了化學(xué)農(nóng)藥不安全，微生物源農(nóng)藥種類較少的問(wèn)題，為農(nóng)業(yè)殺菌劑的開發(fā)增添了新的途徑。

2、本發(fā)明鏈霉菌發(fā)酵液對(duì)楊樹灰斑病菌有抑制作用，對(duì)楊樹葉枯病菌、茄病鐮刀菌、小麥根腐病菌、玉米彎孢病菌和水稻惡苗病菌也有一定抑制作用。

附圖說(shuō)明

圖1為未加入鏈霉菌發(fā)酵液的楊樹灰斑病菌的生長(zhǎng)狀態(tài)圖；

圖2為加入試驗(yàn)一得到的鏈霉菌發(fā)酵液后的楊樹灰斑病菌的生長(zhǎng)狀態(tài)圖。

具體實(shí)施方式

具體實(shí)施方式一：本實(shí)施方式的一種鏈霉菌發(fā)酵液的制備方法是按以下步驟進(jìn)行的：

一、菌種的活化培養(yǎng)：將鏈霉菌(Streptomyces?sp.)Syjd3接種高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基上，在溫度為27～29℃條件下培養(yǎng)4～6d，得到活化的鏈霉菌(Streptomyces?sp.)Syjd3；