[發明專利]雙鏈RNA或其修飾物在制備腫瘤抑制劑中的應用

在審

• 申請號: 201410383877.3
• 申請日: 2014-08-06
• 公開（公告）號: CN104147616A
• 公開（公告）日: 2014-11-19
• 發明（設計）人: 王糾;張雅鷗;吳江斌;何杰;許乃寒;謝偉東
• 申請（專利權）人: 清華大學深圳研究生院
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及生物技術領域中雙鏈RNA或其修飾物在制備腫瘤抑制劑中的應用。

背景技術

RNA干擾(RNA?interference，RNAi)是一種分子生物學上與靶基因序列同源的短雙鏈RNA(dsRNA)誘導的序列特異性的特別有效的轉錄后基因沉默現象(Fire，1998)，其機制是通過阻礙特定基因的翻譯或轉錄來抑制基因表達。當細胞中導入與內源性mRNA編碼區同源的雙鏈RNA時，該mRNA發生降解而導致基因表達沉默。RNAi是真核細胞特有的一種基因沉默機制，在決定細胞命運、細胞分化方向及存留等方面起著極為重要的作用。由于RNAi具有鎖定任何引起疾病或疾病相關蛋白表達的能力，且RNAi技術特異性高，作用迅速，副反應小，在有效地沉默靶基因的同時，對細胞本身的調控系統沒有影響。目前RNAi已作為一種高效的序列特異性基因剔除技術在傳染性疾病和惡性腫瘤基因治療領域發展極為迅速。

微小核酸(miRNA)是一種內源的、在體內廣泛表達的包含21～25個核苷酸的內源性非編碼小RNA，是引起RNA干擾現象直接原因的物質之一。miRNA由具有發夾結構的約70～90個堿基大小的單鏈RNA前體經過Dicer酶加工后生成，在進化上高度保守，通過翻譯抑制調控基因表達而不影響轉錄本的穩定性。每個miRNA可以有多個調控(靶)基因，而幾個miRNA也可以調節同一個基因，據推測，miRNA調節著人類三分之一的基因。miRNA調節機體重要的生理與病理過程，在細胞分化，生物發育及疾病發生發展過程中發揮巨大作用，且具有很強的組織特異性，已經引起越來越多的研究人員的關注。

周期蛋白依賴性激酶4(cyclin?dependent?kinase?4，CDK4)作為一種重要的周期蛋白。研究表明腫瘤細胞惡性增殖主要是由于細胞周期的失調所導致，Cyclin?D-CDK4/CDK6是調控細胞周期由G1向S期的過渡關鍵因子。CDK4基因己被證實是一種癌基因，與腫瘤的發生、發展及患者的預后密切相關。在多種腫瘤細胞如胃癌、乳腺癌、非小細胞肺癌、子宮內膜癌、肝癌和癌變組織中都發現伴隨有CDK4的過度表達和過度活化現象，因此CDK4可做為腫瘤基因治療中的一個潛在靶點。

此外G1期是增殖細胞唯一能接受從外界傳入的增殖或抑制增殖信號的時期，作用在G1期或G1/S交界期，啟動細胞周期和促進DNA合成的cyclin?D是一個比其它cyclins更加敏感的指標。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是如何抑制腫瘤細胞和/或抑制腫瘤。所述抑制腫瘤細胞可為抑制腫瘤細胞增殖，所述抑制腫瘤可為抑制腫瘤的發生和/或抑制腫瘤的生長。

為解決上述技術問題，本發明首先提供了一種雙鏈RNA或其修飾物在制備腫瘤抑制劑或腫瘤細胞抑制劑中的應用，所述雙鏈RNA，其名稱為dsRNA21，所述dsRNA21的一條鏈的從5’端至3’端的核苷酸序列為序列表中SEQ?ID?No.1，所述dsRNA21的另一條鏈的從3’端至5’端的核苷酸序列為序列表中SEQ?ID?No.2。

其中，SEQ?ID?No.1由21個核糖核苷酸組成，SEQ?ID?No.2由21個核糖核苷酸組成，SEQ?ID?No.1的第1-19位核糖核苷酸與SEQ?ID?No.2的第3-21位核糖核苷酸反向互補，將二者形成的雙鏈RNA命名為dsRNA21。

上述應用中，所述修飾物具體可為對所述dsRNA21進行修飾得到的雙鏈RNA修飾物，其名稱為dsRNA21-mimic。所述雙鏈RNA修飾物中，各種修飾方法均可選用，包括選自核糖修飾、堿基修飾和磷酸骨架修飾中的一種或幾種的組合等。如可對所述dsRNA21進行下述A1)或A2)或A3)的修飾得到所述雙鏈RNA修飾物：

A1)對所述dsRNA21的核糖的2′-OH進行修飾；

A2)對所述dsRNA21的連接核苷酸的磷酸二酯鍵進行修飾；

A3)對所述dsRNA21的核糖的5′端連上膽固醇的修飾。

上述應用中，所述對所述dsRNA21的連接核苷酸的磷酸二酯鍵進行修飾為將所述磷酸二酯鍵的氧用硫取代；所述對所述dsRNA21的核糖的2′-OH進行修飾為將所述2′-OH用甲氧基或氟取代或者對所述2′-OH進行脫氧修飾。

在本發明的一個實施例中，所述雙鏈RNA修飾物是將所述dsRNA21的SEQ?ID?No.2所示鏈中所有胞苷酸的2′-OH均取代為甲氧基且SEQ?ID?No.1所示鏈未進行修飾得到的修飾物，其名稱為2′-OMe-dsRNA21。