[發(fā)明專利]一種處理流感病毒收獲液的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410380228.8
• 申請日: 2014-08-04
• 公開（公告）號: CN104195118A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 龐鑒勇;陳秋蘭;惠增弟;張景敏;李軍;胡偉;尹衛(wèi)東
• 申請（專利權(quán)）人: 北京科興生物制品有限公司
• 主分類號: C12N7/02
• 分類號: C12N7/02;A61K39/145;A61P31/16;C12R1/93
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及疫苗制備領(lǐng)域，具體地，涉及一種處理流感病毒收獲液的方法。

背景技術(shù)

流行性感冒(influenza，簡稱流感)是由甲(A)、乙(B)、丙(C)三型流感病毒引起的急性呼吸道感染疾病，具有傳染性強、傳播速度快的特點。甲型流感病毒常以流行形式出現(xiàn)，引起世界性流感大流行，它在動物中廣泛分布，并能在動物中引起流感流行和動物大量死亡；乙型流感病毒常常引起流感局部暴發(fā)；丙型流感病毒主要以散在形式出現(xiàn)，主要侵襲嬰幼兒，一般不引起流感流行。流感主要通過空氣中的飛沫、人與人之間的接觸或與被污染物品的接觸傳播。接種流感疫苗是預(yù)防和控制流感的最有效手段之一，可以減少接種者感染流感的機會或者減輕流感癥狀。

根據(jù)WHO相關(guān)指南規(guī)定，流感疫苗的生產(chǎn)可使用健康雞群來源的雞胚。目前，國內(nèi)外流感疫苗生產(chǎn)普遍遵循這一原則，基本工藝步驟包括毒種接種雞胚尿囊腔、培養(yǎng)、病毒收獲、純化、滅活、裂解、再純化等。但傳統(tǒng)的雞胚培養(yǎng)技術(shù)存在收獲液成分復(fù)雜不易處理問題。收獲液中雜質(zhì)主要有卵清、蛋殼、雞血細胞、來自蛋殼表面和雞胚本身可能存在的外源性微生物等，這些雜質(zhì)會增加后期滅活和純化工藝的難度，尤其微生物過多，會產(chǎn)生大量細菌內(nèi)毒素，增加疫苗的副反應(yīng)，給疫苗的安全性帶來風(fēng)險。中國藥典第三部(2010版)中規(guī)定收獲液中微生物限度應(yīng)小于10⁵CFU/ml。

為了滿足流感疫苗收獲液中國家規(guī)定的微生物小于10⁵CFU/ml的標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)有各廠家在處理流感病毒收獲液過程中使用了不同的工藝技術(shù)，分別采用絹布過濾，20μm-1μm多級濾器過濾，管式離心機分離澄清，0.45μm濾芯過濾，除菌級0.2μm濾芯過濾，或前述兩種或兩種以上方法的組合。但這些處理流感病毒收獲液方法的效果均不理想，主要表現(xiàn)在流感病毒抗原損失較大、收獲液微生物限度降低不顯著、使用大量濾芯造成成本增加。因此需要開發(fā)一種處理流感病毒收獲液的新工藝來解決上述問題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種處理流感病毒收獲液的方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)在處理后的流感病毒收獲液中流感病毒抗原損失較大、收獲液中微生物限度降低不顯著、且使用大量濾芯造成生產(chǎn)成本增加的諸多問題。

本發(fā)明提供的一種處理流感病毒收獲液的方法，包括以下步驟：

(1)將流感病毒收獲液經(jīng)碟片離心機離心后，收集澄清液；

(2)澄清液通過預(yù)過濾器過濾；

(3)濾液經(jīng)過減菌濾器過濾；

本發(fā)明所述的流感病毒收獲液為接種流感病毒后收獲的雞胚尿囊液。所述的流感病毒收獲液獲得方法是將10²-10⁵EID₅₀/ml的流感病毒接種于9-11日齡雞胚的尿囊腔中，將接種后雞胚置于32-36℃孵化器中培養(yǎng)30-90小時，留下活胚，置0-10℃冷胚后，收獲的雞胚尿囊液即為流感病毒收獲液。

本發(fā)明方法中，步驟(1)碟片離心機轉(zhuǎn)速為4000-10000rpm,排渣時間為30-90min。

優(yōu)選地，步驟(1)碟片離心機轉(zhuǎn)速為7200rpm,排渣時間為60min。

其中，步驟(1)進料速度控制在2.0～5.0kg/min。進料即將流感病毒收獲液投放入碟片離心機。

本發(fā)明方法中，步驟(2)的預(yù)過濾器孔徑≤5μm。

優(yōu)選地，步驟(2)的預(yù)過濾器孔徑為1.0μm。

步驟(2)過濾過程中濾器壓力≤0.2MPa。優(yōu)選≤0.1MPa。

本發(fā)明方法中，步驟(3)的減菌濾器孔徑為0.2-0.45μm。優(yōu)選0.2μm

其中，步驟(3)過濾過程中濾器壓力≤0.2MPa。優(yōu)選≤0.1MPa。

本發(fā)明提供了上述方法在制備流感疫苗中的應(yīng)用。

本發(fā)明的創(chuàng)新之處在于將碟片離心機、預(yù)過濾器、減菌濾器的組合應(yīng)用于流感病毒收獲液的處理中。碟片離心機是立式連續(xù)流離心機的一種，其轉(zhuǎn)鼓裝在立軸上端，通過傳動裝置由電動機驅(qū)動而高速旋轉(zhuǎn)。在轉(zhuǎn)鼓內(nèi)有一組互相套疊在一起的碟形零件——碟片。碟片與碟片之間留有很小的間隙。料液從位于轉(zhuǎn)鼓中心的進料管進入轉(zhuǎn)鼓。再流過碟片之間的間隙，固體顆粒(或液滴)在離心機作用下沉降到碟片上形成沉渣(或液層)。沉渣沿碟片表面滑動而脫離碟片并積聚在轉(zhuǎn)鼓內(nèi)直徑最大的部位，分離后的液體從出液口排出轉(zhuǎn)鼓。