[發明專利]嘌呤類物質的制備方法

在審

• 申請號: 201410379636.1
• 申請日: 2014-08-04
• 公開（公告）號: CN104342397A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發明（設計）人: 川崎壽;橋本賢一;中松亙;淺原貴之
• 申請（專利權）人: 味之素株式會社
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N1/20;C12P19/32;C12P19/40;C12R1/185;C12R1/07;C12R1/15;C12R1/19;C12R1/125
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 張濤

1.一種具有嘌呤類物質生產能力的細菌，

其為埃希氏菌屬(Escherichia)細菌、芽孢桿菌屬(Bacillus)細菌或產氨棒桿菌(Corynebacterium?ammoniagenes)，且

其已被修飾從而保持突變型yggB基因，

其中，所述突變型yggB基因為具有突變的yggB基因，所述突變使上述細菌的嘌呤類物質的生產能力得到提高。

2.權利要求1中所述的細菌，其中，所述突變選自下列(1)～(3)：

(1)編碼野生型YggB蛋白質的第419～533位的氨基酸殘基的區域中的突變；

(2)編碼野生型YggB蛋白質的跨膜區的區域中的突變；和

(3)上述突變的組合。

3.權利要求2中所述的細菌，其中，所述突變(1)是向編碼野生型YggB蛋白質的第419～533位的氨基酸殘基的區域中插入堿基序列。

4.權利要求2中所述的細菌，其中，所述突變(1)是將存在于野生型YggB蛋白質的第419～533位的脯氨酸殘基替換為其它氨基酸的突變。

5.權利要求2～4中任一項所述的細菌，其中，所述跨膜區選自野生型YggB蛋白質的第1～23位、第25～47位、第62～84位、第86～108位和第110～132位的氨基酸殘基。

6.權利要求2～5中任一項所述的細菌，其中，所述突變(2)不伴有移碼突變和無義突變。

7.權利要求2～6中任一項所述的細菌，其中，所述突變(2)選自下列(2a)～(2d)：

(2a)在野生型YggB蛋白質的第14位亮氨酸殘基和第15位色氨酸殘基之間插入一個或多個氨基酸殘基的突變；

(2b)將野生型YggB蛋白質的第100位丙氨酸殘基替換為其它的氨基酸殘基的突變；

(2c)將野生型YggB蛋白質的第111位丙氨酸殘基替換為其它的氨基酸殘基的突變；和

(2d)上述突變的組合。

8.權利要求7中所述的細菌，其中，在所述第14位亮氨酸殘基和第15位色氨酸殘基之間插入Cys－Ser－Leu。

9.權利要求7或8中所述的細菌，其中，將所述第100位和/或第111位的丙氨酸殘基替換為蘇氨酸殘基。

10.權利要求1～9中任一項所述的細菌，其中，所述野生型YggB蛋白質是下列(A)或(B)中所述的蛋白質：

(A)具有SEQ?ID?NO:9,11,13或15所示的氨基酸序列的蛋白質、

(B)具有在SEQ?ID?NO:9,11,13或15所示的氨基酸序列中，包含替換、缺失、插入或添加一個或多個氨基酸殘基的氨基酸序列，且作為力敏感性通道發揮作用的蛋白質。

11.權利要求1～10中任一項所述的細菌，其已被修飾從而使參與嘌呤類物質生物合成的酶的活性增加。

12.權利要求1～11中任一項所述的細菌，其中所述嘌呤類物質選自肌苷、黃苷、鳥苷和腺苷。

13.權利要求1～11中任一項所述的細菌，其中所述嘌呤類物質選自肌苷酸、黃苷酸和鳥苷酸。

14.權利要求1～13中任一項所述的細菌為大腸桿菌。

15.權利要求1～13中任一項所述的細菌，其是枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)或解淀粉芽孢桿菌(Bacillus?amyloliquefaciens)。

16.權利要求1～13中任一項所述的細菌為產氨棒桿菌(Corynebacterium?ammoniagenes)。

17.一種制備嘌呤類物質的方法，其包括在培養基中培養權利要求1～16中任一項所述的細菌，從而在培養基中積累嘌呤類物質，以及從該培養基中回收所述嘌呤類物質。

18.一種制備嘌呤核苷的方法，其包括在培養基中培養權利要求1～16中任一項所述的細菌，從而在培養基中積累嘌呤核苷，以及從該培養基中回收所述嘌呤核苷。

19.一種制備嘌呤核苷酸的方法，其包括在培養基中培養權利要求1～16中任一項所述的細菌，從而在培養基中積累嘌呤核苷酸，以及從該培養基中回收所述嘌呤核苷酸。

20.一種制備嘌呤核苷酸的方法，其包括在培養基中培養權利要求1～16中任一項所述的細菌，從而在培養基中積累嘌呤核苷，對所述嘌呤核苷進行磷酸化從而生成嘌呤核苷酸，以及回收所述嘌呤核苷酸。