[發明專利]美洲大蠊總蛋白的提取方法

在審

• 申請號: 201410379560.2
• 申請日: 2014-08-04
• 公開（公告）號: CN104341485A
• 公開（公告）日: 2015-02-11
• 發明（設計）人: 王達賓;蘇柘僮;熊永愛;鄒俊波;姜小東;郭華
• 申請（專利權）人: 成都百草和濟科技有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽

技術領域

本發明涉及美洲大蠊總蛋白的提取方法。

背景技術

美洲大蠊(Periplaneta?americana?Linnaeus)為昆蟲綱有翅亞綱蜚蠊目蜚蠊科大蠊屬昆蟲。已有研究指出經提取、純化而得的美洲大蠊蛋白具有良好的對抗四氯化碳所致小鼠急性肝損傷作用，本研究前期工作基礎亦證實美洲大蠊的水閃式提取物藥效明顯，提示了閃式提取法應用于該活性部位制備過程的潛質，因此本研究擬以總蛋白含量為指標，對閃式提取法與傳統提取方法展開比較，并應用閃式提取法對提取工藝進行單因素考察，以確定主要因素與水平，繼而采用正交設計法優選閃式提取工藝，為動物藥蛋白類熱不穩定活性成分的提取建立技術平臺。

中國專利申請：CN?103083363?A，公開了美洲大蠊提取物的制備方法，它是采用閃式提取方法進行提取的，其中，出膏率平均為47.59％，蛋白質含量可以達到約15mg/g。

發明內容

本發明的目的在于提供一種提取效果更優異的美洲大蠊總蛋白的提取方法。

本發明提供了美洲大蠊總蛋白的提取方法，它包括如下操作步驟：

取美洲大蠊，粉碎，以水為溶劑，于25～55℃下以閃式提取1～3次，每次加水10～22倍量，1～3min/次，提取電壓為50～110V，水的pH為6～10。

進一步地，提取溫度為45～55℃，優選為45℃。

進一步地，閃式提取為1min/次，提取電壓70V。

優選地，提取次數為3次。

進一步地，每次加水量為16～20倍。

優選地，每次加水量為20倍。

中國專利申請：CN?103083363?A中，并未提及任何關于溶劑pH與提取效果之間的關聯。然而，本發明在研究中意外地發現，提取溶劑的pH對提取效果也有顯著影響，因此，本發明中還對溶劑pH進行了考察：

進一步地，水的pH為8.3～9.3。在此條件下，提取效果優于純水。

優選地，水的pH為8.8。

本發明通過對提取方法的篩選，最終得到了美洲大蠊的最佳閃式提取方法，能夠保證較高的蛋白質收率基礎上，縮短提取時間，為工業化大生產提供了可能。

本發明經實驗驗證，所得美洲大蠊閃式提取物中總蛋白質的含量和出膏率均明顯優于專利號CN?103083363?A的專利公開方法所制備的美洲大蠊閃式提取樣品。

具體實施方式

實施例1??本發明提取方法

取美洲大蠊藥材，粉碎，以水溶溶劑，于45℃下以閃式提取3次，每次加水20倍量，1min/次，提取電壓為70V，水的pH為9.3。

實施例2??本發明提取方法

取美洲大蠊藥材，粉碎，以水溶溶劑，于45℃下以閃式提取3次，每次加水20倍量，1min/次，提取電壓為70V，水的pH為8.8。

實施例3??提取方法的篩選

1??材料

美洲大蠊藥材(購自云南騰沖，經生藥教研室盧先明教授鑒定為蜚蠊科大蠊屬昆蟲美洲大蠊Periplaneta?americana?L.),考馬斯亮藍G250(成都市科龍化工試劑廠，批號20120924)。

JHBE-50T型閃式提取器(河南金鼐科技發展有限公司)，UV-1700型紫外-可見分光光度計(島津制作所分析計測事業部)。

2??方法與結果

2.1??總蛋白含量測定方法

2.1.1??供試品溶液的制備方法

取藥材適量，按各法提取，合并濾液。2.3項下濾液定容至500mL，作為儲備液，精密吸取水提儲備液8mL定容至25mL，作為供試品溶液；2.4項下濾液定容至1000mL，作為儲備液，精密吸取水提儲備液5或10mL定容至25mL，作為供試品溶液。

2.1.2??標準曲線的建立

以A₅₉₅為縱坐標，BSA濃度為橫坐標，回歸方程為y＝0.0041x+0.1500(r＝0.9995)，在30.69～153.45μg，其濃度與吸光度之間線性關系良好。

2.1.3??供試品溶液含量測定

精密吸取供試品液各1mL，按2.4.2顯色，測定A₅₉₅。通過標準曲線計算總蛋白含量。

2.2??出膏率測定

按照2.1.1項下方法制備儲備液，各取100mL置蒸發皿中，水浴揮干，105℃常壓干燥至恒重，稱定質量，計算出膏率。