[發明專利]脂肪酸結合型白蛋白-藥物納米粒子凍干制劑及制備方法

有效

• 申請號: 201410378748.5
• 申請日: 2014-07-31
• 公開（公告）號: CN104127881B
• 公開（公告）日: 2019-11-05
• 發明（設計）人: 張旋;王潔銀
• 申請（專利權）人: 天津派格生物技術有限公司
• 主分類號: A61K47/62
• 分類號: A61K47/62;A61K9/19;A61K45/00;A61P35/00
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 陸藝

1.一種脂肪酸結合型白蛋白-藥物納米粒子凍干制劑的制備方法，由如下步驟組成：

(1)液體A：為水不相溶的有機溶劑，或體積比為10～5:5～1的水不相溶的有機溶劑和無水乙醇的混合液，所述水不相溶的有機溶劑為氯仿、二氯甲烷或乙酸乙酯；溶液B：用液體A配制濃度為0.0033～360mg/ml的靜脈注射用脂肪酸溶液，所述靜脈注射用脂肪酸為油酸、亞油酸、肉豆蔻酸或甘油三酯；液體C：無菌條件下，用注射用水配制濃度為10～200mg/ml的白蛋白水溶液，按體積比為1:6.67～333的比例將液體A滴入以5,000～15,000rpm轉速攪拌的白蛋白溶液中，繼續攪拌2～10分鐘，使與白蛋白結合的脂肪酸萃取于液體A中，制得液體C；

(2)脂肪酸結合型白蛋白-藥物納米粒子混懸液的制備：

用下述幾種方式制備：

方式一：

用溶液B溶解水不溶性藥物，獲濃度為12.5mg/ml～600mg/ml的液體D，按體積比為0.1％～7.2％的比例，將液體D滴入攪拌速度為3,000rpm～30,000rpm的液體C中，繼續攪拌10～60分鐘，制得脂肪酸結合型白蛋白-水不溶性藥物納米粒子溶液型混懸液；

或者，用溶液B溶解水不溶性藥物,獲濃度為12.5mg/ml～600mg/ml的液體D，按體積比為0.1％～7.2％的比例，將液體D滴入攪拌速度為10,000rpm～12,000rpm的液體C中，繼續攪拌5±1分鐘，加入高壓微射流機進料容器中，在4±1℃，避光，壓力為6,000psi～40,000psi下，連續2～8個循環高壓勻漿處理，制得脂肪酸結合型白蛋白-水不溶性藥物納米粒子溶液型混懸液；

液體C中液體A的體積與溶解水不溶性藥物的溶液B的體積之和為油相，液體C中的白蛋白水溶液的體積為水相，油相體積與水相體積之比為0.4％～17.8％；靜脈注射用脂肪酸與白蛋白的質量比為0.0001％～5％；水不溶性藥物與白蛋白的質量比為：1％～20％；

方式二：

1)按1～10mg：1ml的比例將水不溶性藥物與含0.4～2mg/ml藥用級維生素E的大豆油混合；或按1～10mg：1ml的比例將水不溶性藥物與含50～100mg/ml維生素C的注射用水混合；在4±1℃、避光，壓力為15,000～30,000psi下勻漿處理1～3次；再經4℃下、避光、20,000～35,000rpm離心10～60min，去除上清液，獲得水不溶性藥物超微納米粒子；按40mg/ml～600mg/ml比例，將水不溶性藥物超微納米粒子混懸于溶液B中，獲得液體D’，為含脂肪酸、水不溶性藥物超微納米粒子和有機溶劑的懸液；

2)按體積比為0.3％～4.0％的比例，將液體D’滴入攪拌速度為3,000rpm～30,000rpm的液體C中，繼續攪拌15～60分鐘，制得脂肪酸結合型白蛋白-水不溶性藥物納米粒子懸液型混懸液；或按體積比為0.3％～4.0％的比例，將液體D’滴入攪拌速度為3,000rpm～12,000rpm的液體C中，繼續攪拌5±1分鐘，加入高壓微射流機進料容器中，在4±1℃，避光、壓力為15,000psi～30,000psi下，連續2～6個循環高壓勻漿處理，制得脂肪酸結合型白蛋白-水不溶性藥物納米粒子懸液型混懸液；

液體C中液體A的體積與液體D’中溶液B體積之和為油相，液體C中的白蛋白水溶液的體積為水相，油相體積與水相體積之比為：0.6％～15.6％；靜脈注射用脂肪酸與白蛋白的質量比為0.0001％～1％；水不溶性藥物與白蛋白的質量比為：1％～25％；

方式三：

1)按5～10mg：1ml的比例將水溶性藥物與含0.4～2mg/ml藥用級維生素E的大豆油混合；在4±1℃、避光，壓力為15,000～30,000psi下勻漿處理1～3次；再經4±1℃下、避光、5,000～30,000rpm持續離心10～60min，去除上清液，獲得水溶性藥物超微納米粒子；按6.6mg/ml～375mg/ml比例，將水溶性藥物超微納米粒子混懸于溶液B中，獲得液體D’，為含脂肪酸、水溶性藥物超微納米粒子和有機溶劑的懸液；

2)按體積比為0.8％～7.0％的比例，將液體D’滴入攪拌速度為12,000rpm～32,000rpm的液體C中，繼續攪拌5～30分鐘，制得脂肪酸結合型白蛋白-水溶性藥物納米粒子懸液型混懸液；或按體積比為0.8％～7.0％的比例，將液體D’滴入攪拌速度為10,000rpm～12,000rpm的液體C中，繼續攪拌5±1分鐘，加入高壓微射流機進料容器中，在4±1℃，避光、壓力為15,000psi～30,000psi下，連續3～8個循環高壓勻漿處理，制得脂肪酸結合型白蛋白-水溶性藥物納米粒子懸液型混懸液；

液體C中液體A的體積與液體D’中溶液B的體積之和為油相，液體C中的白蛋白水溶液的體積為水相，油相體積與水相體積之比為：1％～15.8％；靜脈注射用脂肪酸與白蛋白的質量比為0.001％～1.4％；水溶性藥物與白蛋白的質量比為：1％～20％；

方式四：

1)調節水溶性藥物與液體C中白蛋白結合的條件，將水溶性藥物粉末或水溶性藥物水溶液加入液體C中，在100～1000rpm下攪拌1～4小時，使水溶性藥物與液體C中白蛋白結合制得白蛋白-水溶性藥物結合溶液，即液體C’；

2)按體積比為0.8％～7.5％的比例將溶液B，滴入攪拌速度為15,000rpm～25,000rpm的液體C’中，繼續攪拌10～60分鐘，制得脂肪酸結合型白蛋白-水溶性藥物納米粒子蛋白結合型混懸液；或按體積比為0.8％～7.5％的比例將溶液B，滴入攪拌速度為10,000rpm～12,000rpm的液體C’中，繼續攪拌5±1分鐘，加入高壓微射流機進料容器中，在4±1℃，避光，壓力為10,000psi～25,000psi下，連續1～6個循環高壓勻漿處理，制得脂肪酸結合型白蛋白-水溶性藥物納米粒子蛋白結合型混懸液；

液體C中液體A的體積與溶液B的體積之和為油相，而白蛋白-水溶性藥物結合溶液的體積為水相，油相體積與水相體積之比為：1％～16％；靜脈注射用脂肪酸與白蛋白的質量比為0.002％～15％；水溶性藥物與白蛋白的質量比為：1％～25％；

方式五：

按體積比為1.4％～3.3％的比例，將溶液B滴入攪拌速度為20,000rpm～25,000rpm的液體C中，繼續攪拌10～20分鐘，制得脂肪酸結合型白蛋白納米粒子混懸液；或按體積比為1.4％～3.3％的比例，將溶液B滴入攪拌速度為10,000rpm～12,000rpm的液體C中，繼續攪拌5±1分鐘后，加入高壓微射流機進料容器中，在4±1℃下，避光，壓力為10,000psi～25,000psi下，連續2～6個循環高壓勻漿處理，制得脂肪酸結合型白蛋白納米粒子混懸液；

將所述脂肪酸結合型白蛋白納米粒子混懸液放入真空旋轉蒸發儀中，在35±2℃、20mmHg減壓下，60～80轉/分旋轉蒸發20～30分鐘，去除全部有機溶劑，獲半透明乳液；

調節水溶性藥物與液體C中白蛋白結合的條件，將水溶性藥物粉末或水溶性藥物水溶液加入半透明乳液中，在250rpm～500rpm下攪拌2～4小時，使水溶性藥物與半透明乳液中白蛋白結合制得脂肪酸結合型白蛋白-水溶性藥物納米粒子空粒結合型乳液；

液體C中液體A的體積與溶液B的體積之和為油相，半透明乳液的體積為水相，油相體積與水相體積之比為：2.0％～16.4％；靜脈注射用脂肪酸與白蛋白的質量比為0.001％～3.1％；水溶性藥物與白蛋白的質量比為：2.5％～15％；

方式六：

1)用溶液B溶解水不溶性藥物，獲濃度為10mg/ml～400mg/ml的液體D；

2)按5～10mg：1ml的比例將水溶性藥物與含0.4～2mg/ml藥用級維生素E的大豆油混合；在4±1℃、避光，壓力為15,000～30,000psi下勻漿處理1～3次；再經4±1℃下、避光、5,000～30,000rpm持續離心10～60min，去除上清液，獲得水溶性藥物超微納米粒子；

3)用液體D混懸水溶性藥物超微納米粒子，得到含脂肪酸、水不溶性藥物、水溶性藥物超微納米粒子的懸液，按體積比為0.1％～7.2％的比例，將含脂肪酸、水不溶性藥物、水溶性藥物超微納米粒子的懸液滴入攪拌速度為3,000rpm～30,000rpm的液體C中，繼續攪拌10～60分鐘，制得脂肪酸結合型白蛋白-水不溶性和水溶性藥物納米粒子懸液型混懸液；或用液體D混懸水溶性藥物超微納米粒子，得到含脂肪酸、水不溶性藥物、水溶性藥物超微納米粒子的懸液，按體積比為0.1％～7.2％的比例，將含脂肪酸、水不溶性藥物、水溶性藥物超微納米粒子的懸液滴入攪拌速度為10,000rpm～12,000rpm的液體C中，繼續攪拌5±1分鐘，加入高壓微射流機進料容器中，在4±1℃，避光，壓力為3,000psi～40,000psi下，連續2～8個循環高壓勻漿處理，制得脂肪酸結合型白蛋白-水不溶性和水溶性藥物納米粒子懸液型混懸液；

方式七：

1)用溶液B溶解水不溶性藥物，獲濃度為10mg/ml～400mg/ml的液體D；

2)調節水溶性藥物與液體C中白蛋白結合的條件，將水溶性藥物粉末或水溶性藥物水溶液加入液體C中，在100～1000rpm下攪拌1～4小時，使水溶性藥物與液體C中白蛋白結合制得白蛋白-水溶性藥物結合溶液，為液體C’；

3)按體積比為0.1％～7.2％的比例，將液體D滴入攪拌速度為15,000rpm～25,000rpm的液體C’中，繼續攪拌10～60分鐘，制得脂肪酸結合型白蛋白-水不溶性和水溶性藥物納米粒子蛋白結合型混懸液；或按積比為0.1％～7.2％的比例，將液體D滴入攪拌速度為10,000rpm～12,000rpm的液體C’中，繼續攪拌5±1分鐘，加入高壓微射流機進料容器中，在4±1℃，避光，壓力為6,000psi～40,000psi下，連續2～8個循環高壓勻漿處理，制得脂肪酸結合型白蛋白-水不溶性和水溶性藥物納米粒子蛋白結合型混懸液；

方式八

1)用溶液B溶解水不溶性藥物，獲濃度為10mg/ml～400mg/ml的液體D；

2)按體積比為0.1％～7.2％的比例，將液體D滴入攪拌速度為3,000rpm～30,000rpm的液體C中，繼續攪拌10～60分鐘，制得脂肪酸結合型白蛋白-水不溶性藥物納米粒子溶液型混懸液；或按積比為0.1％～7.2％的比例，將液體D滴入攪拌速度為10,000rpm～12,000rpm的液體C中，繼續攪拌5±1分鐘，加入高壓微射流機進料容器中，在4±1℃，避光，壓力為6,000psi～40,000psi下，連續2～8個循環高壓勻漿處理，制得脂肪酸結合型白蛋白-水不溶性藥物納米粒子溶液型混懸液；

3)將脂肪酸結合型白蛋白-水不溶性藥物納米粒子溶液型混懸液放入真空旋轉蒸發儀中，在35±2℃、20mmHg減壓下，60～80轉/分旋轉蒸發20～30分鐘，去除全部有機溶劑，獲半透明乳液；調節水溶性藥物與液體C中白蛋白結合的條件，將水溶性藥物粉末或水溶性藥物水溶液加入半透明乳液中，在250rpm～500rpm下攪拌2～4小時，使水溶性藥物與半透明乳液中白蛋白結合制得脂肪酸結合型白蛋白-水不溶性和水溶性藥物納米粒子空粒結合型混懸液；

(3)乳液的制備

將步驟(2)中方式一～方式四、方式六和方式七制備的混懸液放入真空旋轉蒸發儀中，在35±2℃，負壓下，旋轉蒸發10～30分鐘，去除混懸液中全部有機溶劑，制得半透明的穩定的納米粒子乳液；

(4)凍干制劑的制備

將步驟(2)方式五或步驟(3)獲得的乳液經0.22um膜過濾除菌，或經0.45um和0.22um膜過濾除菌，獲無菌乳液，經真空冷凍干燥24～36小時，制得脂肪酸結合型白蛋白-藥物納米粒子凍干制劑；所述白蛋白為人血清白蛋白或牛血清白蛋白。