[發明專利]一種融合蛋白質、制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201410377969.0
• 申請日: 2014-07-31
• 公開（公告）號: CN104164444A
• 公開（公告）日: 2014-11-26
• 發明（設計）人: 鄧亞光;歐陽慭;鄧偉平;曾支農
• 申請（專利權）人: 宜昌美光硅谷生命科技有限公司
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C07K19/00;C07K1/22;C07K1/14;C07K14/47
• 代理公司: 北京華沛德權律師事務所 11302
• 代理人: 劉杰

1.一種融合蛋白質的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將完整的靶基因的cDNA片段克隆到融合蛋白的表達載體，cDNA克隆時，在完整基因的cDNA片段前，起始密碼子(ATG)之后，加上Xa因子位點異亮氨酸-谷氨酸-甘氨酸-精氨酸(Ile-Glu-Gly-Arg)的脫氧核糖核酸序列；

(2)將步驟(1)得到的含有完整目的基因的亞克隆表達載體，轉型或轉染到表達宿主細胞內，使之在宿主細胞內表達所需融合蛋白質，通過接種培養，獲得含有完整目的基因載體的純克隆細胞株；

(3)使用步驟(2)含有完整目的基因載體的純克隆細胞株，進行量化培養，蛋白表達處理，獲得量化的，有目的融合蛋白質的宿主細胞；

(4)將步驟(3)得到的宿主細胞進行裂解，獲取細胞裂解液，對蛋白質進行純化，獲得分離，純化的融合蛋白質；

(5)使用因子Xa處理融合蛋白質，可獲得純化的目的基因蛋白質。

2.根據權利要求1所述的融合蛋白質的制備方法，其特征在于，所述步驟(1)中加上Xa因子位點異亮氨酸-谷氨酸-甘氨酸-精氨酸(Ile-Glu-Gly-Arg)的脫氧核糖核酸序列，可以保證所表達的蛋白質在Xa切割后，獲得的目的蛋白質的氨基酸順序是所需的，完整的。

3.根據權利要求1所述的融合蛋質白的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)和(5)是通過親和柱來進行蛋白質分離和純化的。

4.根據權利要求1所述的融合蛋白質的制備方法，其特征在于，所述一種代表性融合蛋白為鈣調素融合蛋白，是以鈣調素為目的蛋白質的鈣調素蛋白和麥芽糖結合蛋白的融合蛋白質。

5.一種權利要求1至4任一項所述的制備方法，制備得到的融合蛋白。

6.一種融合蛋白質的應用，其特征在于，利用分離純化獲得的融合蛋白，分離、純化和濃縮目的蛋白質，可用于蛋白質的性能分析和應用。

7.根據權利要求6所述的融合蛋白質的應用，其特征在于，利用融合蛋白，富集生物樣本中的靶分子，達到分離、純化、濃縮和提高檢測靈敏度的目的。

8.根據權利要求6或7所述的融合蛋白質的應用，其特征在于，所述目的融合蛋白質為麥芽糖結合蛋白-鈣調素融合蛋白，可用來結合和濃縮樣本中的一種靶分子為熱休克蛋白90。