[發明專利]一種制備人妊娠特異性糖蛋白9的方法有效
| 申請號： | 201410376676.0 | 申請日： | 2014-08-01 |
| 公開（公告）號： | CN104151407B | 公開（公告）日： | 2016-11-23 |
| 發明（設計）人： | 楊磊;黃驍舾;王敏 | 申請（專利權）人： | 首都醫科大學附屬北京朝陽醫院 |
| 主分類號： | C07K14/245 | 分類號： | C07K14/245;C12N1/21;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢;陳曉慶 |
| 地址： | 100020*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 制備 妊娠 特異性 糖蛋白 方法 | ||
1.一種制備人PSG9蛋白的方法，包括如下步驟：
(1)構建重組菌：將人PSG9蛋白的編碼基因導入宿主大腸桿菌中，得到重組菌；
(2)重組菌誘導培養：將重組菌用IPTG進行誘導培養，IPTG在菌液中的濃度為3uM，誘導培養的溫度為30℃，得到誘導后菌體；
(3)蛋白純化：將誘導后菌體破碎，取上清；將上清用鎳柱進行純化，純化過程中使用的洗脫液是含有40nM咪唑的洗脫緩沖液，收集洗脫液，即得到人PSG9蛋白。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述宿主大腸桿菌為E.coli?BL21(DE3)。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述人PSG9蛋白的編碼基因如SEQ?ID?NO.1中第1-1278位核苷酸的DNA分子所示。
4.根據權利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述將人PSG9蛋白的編碼基因導入宿主大腸桿菌中的方法為：將所述人PSG9蛋白的編碼基因插入載體pET-21α-His的多克隆位點，得到重組載體；再將重組載體導入所述宿主大腸桿菌中。
5.一種用于制備人PSG9蛋白的重組菌，是將人PSG9蛋白的編碼基因導入宿主大腸桿菌中得到的重組菌。
6.根據權利要求5所述的重組菌，其特征在于：所述宿主大腸桿菌為E.coli?BL21(DE3)。
7.根據權利要求5或6所述的重組菌，其特征在于：所述人PSG9蛋白的編碼基因如SEQ?ID?NO.1中第1-1278位核苷酸的DNA分子所示。
8.根據權利要求5-7任一所述的重組菌，其特征在于：所述將人PSG9蛋白的編碼基因導入宿主大腸桿菌中的方法：將所述人PSG9蛋白的編碼基因插入載體pET-21α-His的多克隆位點，得到重組載體；再將重組載體導入所述宿主大腸桿菌中。
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