[發明專利]一種生產N-乙酰氨基葡萄糖的枯草芽孢桿菌及其構建方法和應用在審
| 申請號： | 201410376584.2 | 申請日： | 2014-08-01 |
| 公開（公告）號： | CN104195094A | 公開（公告）日： | 2014-12-10 |
| 發明（設計）人： | 張帆 | 申請（專利權）人： | 張帆 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/75;C12P19/26;C12R1/125 |
| 代理公司： | 石家莊海天知識產權代理有限公司 13101 | 代理人： | 田文其 |
| 地址： | 324000*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 生產 乙酰 氨基 葡萄糖 枯草 芽孢 桿菌 及其 構建 方法 應用 | ||
1.一種生產N-乙酰氨基葡萄糖的枯草芽孢桿菌(Bacillus?subtilis)，其特征在于其保藏編號為CCTCC?M?2014342。
2.生產N-乙酰氨基葡萄糖的枯草芽孢桿菌的構建方法，其特征在于是通過將編碼6-磷酸氨基葡萄糖合成酶、6-磷酸氨基葡萄糖乙酰化酶引入枯草芽孢桿菌宿主菌高效表達，并敲除或失活枯草芽孢桿菌中N-乙酰氨基葡萄糖分解代謝途徑中的6-磷酸氨基葡萄糖脫氨酶基因nagB和gamA、6-磷酸-N-乙酰氨基葡萄糖脫乙酰酶基因nagA、氨基葡萄糖轉運蛋白基因gamP和N-乙酰氨基葡萄糖轉運蛋白基因nagP構建而成。
3.根據權利要求2所述的生產N-乙酰氨基葡萄糖的枯草芽孢桿菌的構建方法，其特征在于所述的構建方法包括如下工藝步驟：
A、分別敲除枯草芽孢桿菌中的nagAB基因簇、gamAP基因簇和nagP基因，獲得基因工程菌宿主；
B、構建GNA1和glmS雙表達載體；
C、將雙表達載體轉入A所得宿主菌，得到最終生產N-乙酰氨基葡萄糖的枯草芽孢桿菌。
4.根據權利要求2所述的生產N-乙酰氨基葡萄糖的枯草芽孢桿菌的構建方法，其特征在于所述的6-磷酸氨基葡萄糖合成酶基因來源于枯草芽孢桿菌或其它具有相同功能酶的微生物。
5.根據權利要求2所述的生產N-乙酰氨基葡萄糖的枯草芽孢桿菌的構建方法，其特征在于所述的6-磷酸氨基葡萄糖乙酰化酶基因來源于釀酒酵母或其它具有相同功能酶的微生物。
6.根據權利要求2所述的生產N-乙酰氨基葡萄糖的枯草芽孢桿菌的構建方法，其特征在于所述的敲除或失活枯草芽孢桿菌中N-乙酰氨基葡萄糖分解代謝途徑中的6-磷酸氨基葡萄糖脫氨酶基因nagB和gamA同時進行。
7.生產N-乙酰氨基葡萄糖的枯草芽孢桿菌在N-乙酰氨基葡萄糖中的應用，其特征在于將生產N-乙酰氨基葡萄糖的枯草芽孢桿菌CCTCC?M?2014342接種至以葡萄糖為碳源的無菌培養基，在37℃條件下通氣發酵70小時。
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