[發(fā)明專利]一種監(jiān)測(cè)治療基因體內(nèi)表達(dá)情況和范圍的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410375803.5
• 申請(qǐng)日: 2014-08-01
• 公開（公告）號(hào): CN104195172A
• 公開（公告）日: 2014-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張巨峰;羅霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東藥學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85;C12N15/65;C12Q1/68;A61B6/00
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛(wèi)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及分子標(biāo)記技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，涉及一種監(jiān)測(cè)治療基因體內(nèi)表達(dá)情況和范圍的方法。

背景技術(shù)

隨著腫瘤分子生物學(xué)和生物技術(shù)的發(fā)展，基因治療在未來有可能成為腫瘤治療的另外一種常規(guī)手段。建立一種監(jiān)測(cè)治療基因體內(nèi)分布和表達(dá)情況方法，有利于評(píng)估治療的有效性和安全性。目前是通過活檢用免疫組化方法來檢測(cè)組織中基因表達(dá)情況，但這種方法存在著明顯的缺點(diǎn)：（1）對(duì)機(jī)體造成損傷，也不能進(jìn)行重復(fù)連續(xù)觀察。（2）不能方便獲得治療基因在體內(nèi)分布和表達(dá)情況的信息。而分子成像方法可以非侵入的觀察和評(píng)估治療基因在體內(nèi)的位置、數(shù)量和持續(xù)表達(dá)時(shí)間。而這些信息對(duì)基因治療應(yīng)用于臨床具有重要價(jià)值。臨床分子成像的前提是需要合適的“標(biāo)記基因”和“標(biāo)記底物”相結(jié)合。HSV-1TK是一個(gè)被廣泛研究的基因。不僅可用來對(duì)多種腫瘤的基因治療。同時(shí)HSV-1TK也是應(yīng)用于分子成像較為成熟的?“標(biāo)記基因”。HSV-1TK酶的三個(gè)常用“標(biāo)記底物”是IUdR、GCV和FIAU，放射性標(biāo)記底物可用于非侵入的分子成像。FIAU做為一個(gè)潛在的“標(biāo)記底物”，是因?yàn)樗堑湫偷?'-氟代核苷類似物，放射性標(biāo)記的碘（I）或碳（C）能摻入分子中，可用gamma相機(jī)和SPECT成像。已有的研究表明，F(xiàn)IAU經(jīng)放射性標(biāo)記后，分子成像的穩(wěn)定性優(yōu)于IUdR或GCV。基于此，以HSV-1TK基因做為“標(biāo)記基因”，F(xiàn)IAU做為“標(biāo)記底物”來進(jìn)行體內(nèi)分子成像。

但對(duì)于許多其它的治療基因沒有辦法來進(jìn)行g(shù)amma相機(jī)和SPECT方法的體內(nèi)分子成像。針對(duì)每個(gè)治療基因來開發(fā)新的探針或放射性標(biāo)記方法代價(jià)非常昂貴，周期也會(huì)較長(zhǎng)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為了克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種監(jiān)測(cè)治療基因體內(nèi)表達(dá)情況和范圍的方法。所述方法能夠?qū)崿F(xiàn)非侵入和實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)治療基因表達(dá)和分布情況。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過以下方案予以實(shí)現(xiàn)的。

一種監(jiān)測(cè)治療基因體內(nèi)表達(dá)情況和范圍的方法，包括如下步驟：將治療基因與標(biāo)記基因HSV-1TK融合，構(gòu)建融合基因載體后，轉(zhuǎn)染治療受體，利用對(duì)HSV-1TK體內(nèi)分子成像的方法來間接反映治療基因在治療受體內(nèi)的表達(dá)情況和體內(nèi)分布情況。

優(yōu)選地，所述治療基因?yàn)镃D基因、?P53基因、Rb基因等。

更優(yōu)選地，所述治療基因?yàn)镃D基因。

把“報(bào)告基因”與“治療基因”融合，由于“報(bào)告基因”與“治療基因”受同一啟動(dòng)子的驅(qū)動(dòng)，因此“報(bào)告基因”與“治療基因”可在體內(nèi)同時(shí)表達(dá)，而且表達(dá)產(chǎn)物是嚴(yán)格等量的，獲得產(chǎn)物是各自蛋白的單一雜合體—融合蛋白，從“報(bào)告基因”分子成像中獲得的信息就能間接反映與之融合的“治療基因”表達(dá)情況，即“治療基因”的“非直接成像”。這樣，在研究其它基因?qū)δ[瘤治療時(shí)，就可以選擇與現(xiàn)有成熟的報(bào)告基因（如HSV-1TK）進(jìn)行融合，這對(duì)觀察眾多的治療基因體內(nèi)分布和表達(dá)情況具有重要的意義。

優(yōu)選地，所述體內(nèi)分子成像的方法為gamma相機(jī)成像或SPECT成像。

優(yōu)選地，所述標(biāo)記基因HSV-1TK以FIAU為標(biāo)記底物，且FIAU的集聚水平與HSV-1TK基因表達(dá)水平成正比。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

本發(fā)明通過將治療基因與標(biāo)記基因HSV-1TK融合，可以利用對(duì)HSV-1TK成像的方法來間接反映治療基因表達(dá)情況和體內(nèi)分布情況，經(jīng)濟(jì)而有效。另外，標(biāo)記基因HSV-1TK本身也是治療基因，與其它腫瘤治療基因融合后，能起到協(xié)同殺傷腫瘤作用。

附圖說明

圖1.在NCIH460TK+細(xì)胞株中，檢測(cè)?HSV-1TK?mRNA表達(dá)、前藥GCV敏感性和FIAU集聚水平三者間的關(guān)系；（A）HSV-1TK?mRNA表達(dá)與前藥GCV敏感性關(guān)系；（B）HSV-1TK?mRNA表達(dá)與FIAU集聚水平的關(guān)系；（C）FIAU集聚水平與前藥GCV的關(guān)系。

圖2.Gamma相機(jī)體內(nèi)成像方法監(jiān)測(cè)HSV-1TK基因的表達(dá)，其中，圖A中箭頭所示為NCIH460TK⁺所成腫瘤，對(duì)側(cè)為野生型NCIH460所成腫瘤；圖B為靜脈注射2-[¹⁴C]FIAU?24小時(shí)后gamma相機(jī)成像；圖C為靜脈注射2-[¹⁴C]FIAU?36小時(shí)后gamma相機(jī)成像。

圖3.融合基因表達(dá)載體的構(gòu)建。